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研究背景:子宫内膜癌系女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其发病率约占女性恶性肿瘤的6%,近20年来发病率呈逐渐上升趋势。目前已经有研究证实ω-3多不饱和脂肪酸对多种恶性肿瘤的发生发展具有抑制作用,而ωo-6多不饱和脂肪酸则起着相反的生物学作用。尽管流行病学调查数据显示摄入-3多不饱和脂肪酸能够有效预防子宫内膜癌的发生,但是始终缺乏直接的实验室证据和相关机理的研究。研究目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸对原发性子宫内膜癌发生与子宫内膜癌生长的影响及其相关的作用机制研究方法:1.利用PTEN基因敲除杂合子小鼠构建原发性子宫内膜癌的模型,在PTEN基因敲除杂合子模型鼠上引入mfat-1基因,研究内源性产生的ω-3多不饱和脂肪酸对子宫内膜癌的发生发展的影响。2.利用携带mfat-1基因的慢病毒感染人类子宫内膜癌细胞株RL95-2,构建稳定表达mfat-1基因的子宫内膜癌细胞株。采用携带mfat-1基因的子宫内膜癌细胞株注射裸鼠皮下形成种植瘤模型,研究mfat-1基因的表达对种植瘤生长的影响。3.采用子宫内膜癌细胞株RL95-2注射裸鼠皮下构建种植瘤模型,再利用含有5%鱼油的饮食进行干预,研究富含ω-3多不饱和脂肪酸饮食对种植瘤生长的影响。4.采用不同浓度的DHA和EPA处理RL95-2细胞,研究外源性ω-3多不饱和脂肪酸对细胞生长的影响。5.利用DHA和AA处理RL95-2细胞,代谢组学方法研究其对细胞内DHA和AA来源的代谢产物的影响。6.利用免疫组化和western blotting分析原发肿瘤和皮下种植瘤内相关信号通路关键蛋白的变化,研究ω-3多不饱和脂肪酸对子宫内膜癌产生影响的机制。研究结果:一、ω-3多不饱和脂肪酸对子宫内膜癌发生发展的影响(1).PTEN基因敲除杂合子模型鼠中子宫内膜增生的发病率为100%,其中子宫内膜癌的发病率是26%,而在引入mfat-1基因后子宫内膜增生的发病率显著下降,只有50%,并且没有一例发生癌变。(2).采用鱼油饮食干预或引入mfat-1基因之后,裸鼠体内的子宫内膜癌细胞种植瘤生长明显减缓,种植瘤体积和重量约为对照组的60%。二、ω-3多不饱和脂肪酸对子宫内膜癌细胞生长的影响(1).采用ω-3多不饱和脂肪酸进行干预或.引入mfat-1基因之后,子宫内膜癌细胞RL95-2中ω-3多不饱和脂肪酸的含量明显上升,ω-6多不饱和脂肪酸与ω-3多不饱和脂肪酸的比值显著下降。(2).DHA能够浓度依赖性的抑制RL95-2细胞的增殖,EPA对RL95-2细胞的增殖没有明显影响。(3).mfat-1基因的表达同样能够在体外抑制RL95-2细胞的增殖。三、ω-3多不饱和脂肪酸影响子宫内膜癌发生发展的相关机制(1).ω-3多不饱和脂肪酸能够降低子宫内膜癌组织的Ki-67、p-Akt和cyclin D1的表达。(2).代谢组学检测结果显示,用AA刺激后,RL95-2细胞内AA来源的 PGE2,LTB4,5-HETE,12-HETE,15-HETE,20-HETE,11,12-EET,14,15-EET等8种代谢产物浓度上升,而转入mfat-1基因之后,上述8种代谢产物的浓度均出现了明显的下降,但是对于采用DHA处理后的RL95-2细胞,仅PGE2的浓度出现了明显的下降,加入PGE2刺激细胞,能够部分恢复mfat-1基因的表达对p-Akt和cyclin D1蛋白表达的抑制作用。(3).ω-3多不饱和脂肪酸能够抑制子宫内膜组织的COX-2的表达。结论:ω-3多不饱和脂肪酸对子宫内膜癌的发生和生长都具有明显的抑制作用,其作用机制主要是通过抑制肿瘤组织内的COX-2的表达和PGE2的合成,进而抑制了 PI3K/Akt/cyclin D1信号通路来实现的。