农杆菌介导Hi-Ⅱ玉米幼胚遗传转化效率及高效再生体系的研究

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农杆菌介导玉米幼胚的遗传转化效率和愈伤组织的再生率一直是制约玉米转基因育种效率的主要原因。本文不仅探索了温度对农杆菌介导Hi-Ⅱ玉米幼胚遗传转化效率的影响,还对愈伤组织的再生体系进行了优化。获得结果如下:(1)发现在农杆菌侵染前,42℃热激幼胚3分钟和38℃热激幼胚9分钟都可以有效提高遗传转化效率,并且可以利用新定义的有效积温理论来解释该现象;(2)发现体细胞诱导养基中,60-90g/L的蔗糖浓度、500mg/L的CH浓度可以促进愈伤组织再分化形成体细胞胚;(3)发现生根培养基中,0.5mg/L的NAA浓度促进不定根的发生,2mg/L的MET浓度促进侧根的发生和不定根的快速伸长,此外,MET还有壮苗的功能;(4)利用优化的再生体系,成功把12个转基因事件的愈伤组织培育成植株,并自交得到全部12个事件的T1代种子,并利用荧光实时定量PCR,成功筛选到一个表达相对较高的转基因事件。
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