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【背景】多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄女性最常见的生殖内分泌综合征，以卵巢内持续存在卵泡发育成熟障碍为特征。颗粒细胞（GCs）对女性卵巢内卵泡、卵母细胞发育以及胚胎形成生长具有重要作用。MicroRNA（MiRNA）作为真核生物体内重要的小RNA调控分子，广泛参与女性卵泡发育成熟、受精、着床及早期胚胎发育等过程，对维持女性正常生育功能起着不可替代的作用。【目的】绘制PCOS患者卵巢颗粒细胞miRNA的表达图谱，找出其与正常对照人群差异表达的miRNAs，进而挖掘可能参与PCOS疾病发生发展的关键miRNAs及其下游调控通路。【方法】（1）临床资料的回顾性分析收集2012年10月2013年9月于安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心行体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子注射（IVF-ET/ICSI）助孕的PCOS患者作为临床研究组（n=176），同时收集同期因单纯输卵管和/或男方因素行IVF/ICSI助孕的卵巢功能正常的不孕患者作为临床对照组（n=312），分析比较两组的基本特征、胚胎实验室指标、助孕结局和卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率。（2）颗粒细胞miRNA的实验研究1）收集因男方因素行ICSI助孕的PCOS患者的颗粒细胞作为实验研究组（n=5），同时收集同期行ICSI助孕的卵巢功能正常者的颗粒细胞作为实验对照组（n=5）。2）分别制备两组颗粒细胞的小RNA cDNA文库，利用Illumina测序技术和CPSS工具对小RNA进行深度测序和数据分析。3）分别绘制两组颗粒细胞miRNA的表达图谱（包括新发现的miRNA），并分析差异表达的miRNAs。4）利用生物信息学软件对差异表达miRNAs的下游靶基因进行预测，进而运用Gene Ontology（GO），Pathway analysis等软件对其潜在的下游调控通路进行富集和筛选。5）在预测和筛选的基础上，运用实时定量RT-PCR、Western Blot和双荧光素酶报告系统等技术对PCOS患者差异表达miRNAs及其下游靶标进行实验验证。【结果】（1）临床资料的回顾性分析1）基本特征的比较PCOS患者的体重指数、基础LH、基础T和HCG日E2水平显著高于对照组（P<0.05），促排卵用药剂量显著低于对照组（P<0.05），平均年龄、不孕年限、基础FSH、基础E2、基础PRL、促排卵用药时间、HCG日子宫内膜厚度两组间比较为无统计学差异（P>0.05）。2）胚胎实验室指标的比较PCOS组获卵数、获胚胎数和可用胚胎数均显著高于对照组（P<0.05），MII卵率和IVF/ICSI正常受精率显著低于对照组（P<0.05）；卵裂率、优质胚胎率、可用胚胎率及优质胚胎数两组间比较无统计学差异（P>0.05）。3）OHSS发生率及助孕结局的比较PCOS组OHSS发生率、早期流产率显著高于对照组（P<0.05），临床妊娠率和胚胎种植率两组间比较无统计学差异（P>0.05）。（2）颗粒细胞miRNA的实验研究1）深度测序结果显示，PCOS患者颗粒细胞中有767种已知miRNAs和347种新发现的miRNAs表达，其中有46种已知miRNAs与对照组相比差异表达。经过qRT-PCR验证，10条随机选择的差异表达miRNAs的相对表达量（PCOS/对照组）与测序结果相一致。2）GO和Pathway分析发现，差异表达的miRNAs参与氨基酸代谢、免疫调节、激素调控、细胞分化、神经发育和调节等多条信号通路。3）经实验验证，miR-483-5p在PCOS患者颗粒细胞中显著高表达，通过与MAPK3mRNA3’ UTR直接结合，降解其mRNA，下调其蛋白的表达。【结论】（1）行IVF/ICSI助孕的PCOS患者卵母细胞成熟率低、受精率低，且早期流产率高。（2）PCOS患者颗粒细胞中46种差异表达的miRNAs可能通过影响氨基酸代谢、免疫调节、激素调控、细胞分化、神经发育和调节等多条信号通路参与PCOS疾病的发生发展过程。（3）在PCOS患者颗粒细胞中高表达的miR-483-5p可能通过降解MAPK3mRNA，下调其蛋白的表达，进而抑制颗粒细胞增殖，使卵泡发育成熟障碍、卵母细胞质量下降，从而导致卵母细胞受精率低、胚胎发育潜能低、流产率高。