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本研究旨在制备一种以脂质成分为外膜,液态氟碳(PFOB)为核心的纳米微粒超声造影剂,检测其粒径、表面电位、稳定性等理化性质及显影效果,并将其与包裹氟碳气体(C3F8)的脂质微泡造影剂进行比较,探讨两者之中哪种更符合超声靶向造影的要求；尝试通过单克隆抗体-生物素-亲和素-生物素桥连,使自制的液态氟碳纳米脂质微粒靶向结合至存活心肌上,特异性增强存活心肌的超声信号,从而实现超声靶向造影对存活心肌的识别。本研究包括以下两个部分：第一部分：PFOB纳米脂质微粒与C3F8纳米脂质微泡一般性质及显影效果比较：体外研究目的制备PFOB纳米脂质微粒与C3F8纳米脂质微泡,比较两者一般理化性质,体外显影效果及耐声压性。方法分别制备PFOB纳米脂质微粒与C3F8纳米脂质微泡,检测两种造影剂形态、粒径、表面电位、浓度以及稳定性,并进行比较。制备生物素化(外膜标记生物素)及空白(外膜未标记生物素)的PFOB脂质微粒及C3F8微泡造影剂。以高频探头分别在基波及CPS两种成像模式下观察各组造影剂加入亲和素前、后的显影效果,并运用METLAB软件分析比较。调节探头输出功率,使MI为0.28与0.56两个水平上对PFOB脂质微粒及C3F8脂质微泡进行超声辐照,分别于辐照10s,20s,30s后,观察显影情况有无变化,并运用METLAB软件分析比较。结果①PFOB脂质微粒与C3F8脂质微泡粒径分别为(152.30±35.99)nm,(774.59±108.59)nm,前者明显小于后者(P<0.05)；表面电位分别为(-40.90±6.51)mV,(-14.80±3.97)mV,前者明显大于后者(P<0.05)。②PFOB脂质微粒造影剂的浓度及粒径,在整个观察期间内无明显改变。C3F8脂质微泡造影剂制备后放置12h以内,浓度尚未发生明显改变,而放置24h,2d,4d及1w后浓度较0h明显减低(P<0.05)；C3F8微泡造影剂放置2d内粒径尚未见明显变化,放置4d及1w后粒径较0h明显增大(P<0.05)。③显微镜下观察,空白PFOB脂质微粒及C3F8脂质微泡加入亲和素前、后微粒分散度均较好,未见明显变化；生物素化PFOB脂质微粒及C3F8脂质微泡加入亲和素前分散度良好,而加入亲和素后均发生聚集现象。空白PFOB脂质微粒及C3F8脂质微泡加入亲和素前、后粒径均无明显变化,生物素化PFOB脂质微粒及C3F8脂质微泡加入亲和素后粒径均较加入前明显增大(P<0.05)。④基波成像模式下体外显影结果显示,加入亲和素前,空白及生物素化PFOB脂质微粒则均未见明显显影,而空白及生物素化C3F8脂质微泡均有较好的显影效果；加入亲和素之后,生物素化PFOB脂质微粒造影剂显影明显增强(P<0.05),而空白PFOB脂质微粒及两组脂质C3F8微泡显影情况无明显改变。⑤CPS成像模式下体外显影结果显示,生物素化PFOB脂质微粒造影剂加入亲和素之前及之后均未见明显信号显示,两者间无明显差异；而生物素化C3F8脂质微泡造影剂加入亲和素之前及之后均可见良好的显影效果,两者的显影强度亦无明显差异。⑥耐声压性测定结果显示,PFOB脂质微粒造影剂在低声压(MI=0.28)及高声压(MI=0.56)环境下,随辐照时间延长,显影强度均未见明显改变。C3F8脂质微泡造影剂在低声压(M10.28)环境下,辐照10s后显影强度尚未见明显改变,辐照20s后显影强度明显减低(P<0.05),辐照30s后显影强度进一步减低(P<0.05)；而在高声压(MI0.56)环境下,辐照10s后显影强度即明显减低(P<0.05),辐照20s,30s后显影强度进一步减低(P<0.05)。结论与C3F8脂质微泡造影剂相比,以PFOB为核心的纳米脂质微粒造影剂无论是穿透性,稳定性,耐声压性能还是靶向显影“信噪比”上均更胜一筹,更符合靶向超声造影剂的要求,具有更为广阔的临床应用前景。第二部分：PFOB纳米脂质微粒对大鼠缺血-再灌注模型中存活心肌靶向显影研究目的制备一种靶向识别存活心肌的PFOB纳米脂质微粒造影剂,观察其体内靶向显影效果。方法制备表面标记有生物素及荧光的PFOB纳米脂质微粒造影剂,检测其粒径、表面电位、浓度等理化性质。将生物素标记的MCP-1抗体、罗丹明标记的亲和素、生物素及荧光标记的脂质微粒造影剂依次注入大鼠缺血-再灌注模型体内,观察其靶向显影效果。12小时后取心脏标本进行冰冻切片,并在荧光显微镜下观察荧光显示情况。取大鼠心脏行TTC-EB染色及HE染色病理切片,将超声显影及荧光显微镜观察结果与病理结果进行对照。结果①自制PFOB纳米脂质微粒造影剂荧光显微镜下分散均匀,外膜呈现明亮的绿色荧光,粒径为(178.80±43.07)nm,表面电位分别为(-36.7±4.64)mV,浓度为(2.35±0.57)×1011／ml。②TTC-EB染色及HE染色病理切片结果显示造膜成功模型,左室前壁及室间隔区域心肌发生梗死,左室前壁部分区域尚存在存活心肌,而左室后壁、下壁及侧壁为正常心肌。③于靶向造影过程中观察缺血-再灌注大鼠短轴切面发现,靶向造影后前壁近内膜下心肌回声较造影前明显增强(P<0.05),而余室壁未见明显增强。④取模型心脏冰冻切片后于荧光显微镜下观察,前壁心肌内可见大量PFOB脂质微粒聚集成团,发出明亮的绿色及红色荧光。而余室壁心肌内未见PFOB微粒聚集,亦未见明显荧光显示。结论自制PFOB纳米脂质微粒造影剂能够对存活心肌进行靶向识别并增强显影,有望为临床上识别存活心肌提供新的影像学检测手段。