H7N9亚型禽流感（H7N9 avian influenza,H7N9 AI）的暴发已对养殖业和人类公共安全造成了严重危害。尤其在2016年9月以来,出现了高致病性变异H7N9亚型禽流感毒株,进一步加重了对养禽业的威胁。因此,为有效控制禽类感染H7N9 AIV,亟需一种有效预防禽感染的H7N9 AIV疫苗。以杆状病毒作为活病毒载体能够诱导宿主的体液免疫和细胞免疫反应,目前利用杆状病毒作为体内基因投送的载体已受到广泛的关注。本研究选取了A/CK/GD/2013（H7N9）的HA基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFast-（C MV）₂的pCMV启动子下游,获得重组质粒pFast-（CHA）₂,该重组质粒经过蓝白斑筛选后获得阳性重组杆粒Bacmid-（CHA）₂,将其转染sf9细胞,获得重组杆状病毒BV-（CHA）₂。该疫苗的特点是重组杆状病毒携带双CMV启动子,能够驱动插入的HA基因,通过基因转导的作用,使其在宿主细胞中内源性表达,具有DNA疫苗的特点。间接免疫荧光试验结果表明,重组杆状病毒BV-（CHA）₂可以在转导的鸡胚成纤维传代细胞（DF-1）中有效表达HA蛋白。为了评价重组杆状病毒BV-（CHA）₂的免疫原性,本研究选择14日龄的SPF鸡作为实验动物,随机分为3组,每组10只,免疫两次,间隔三周,肌肉注射免疫0.5mL（10⁹pfu/mL）重组杆状病毒（BV-（CHA）₂）,同时设杆状病毒野毒（BV-WT）、PBS对照组。二免后3周,滴鼻攻毒10⁶ EID₅₀/100μL A/CK/GD/2013病毒,连续观察14天鸡的排毒情况以及临床症状,并于攻毒后3、5、7、9、11天采集喉头拭子和泄殖腔拭子,分离病毒测定滴度。研究结果表明,在加强免疫后第3周,BV-（CHA）₂免疫组可诱导产生HI抗体,并且HA特异性IgG抗体极显著高于其他对照组（P<0.001）。攻毒后,BV-（CHA）₂免疫组从第3天检测到2只鸡排毒,第5天检测到1只鸡排毒,第7天开始没有检测到排毒;而BV-WT免疫组第3、5、7、9天均检测到排毒鸡只,排毒持续到第9天;PBS组全部检测到排毒,排毒持续到第11天。BV-（CHA）₂可以保护80%的鸡完全无排毒,对另外20%的鸡产生部分保护,主要表现为减少排毒时间以及排毒量,因此,BV-（CHA）₂有望成为控制禽源H7N9流感疫情的候选疫苗。综上所述,重组杆状病毒BV-（CHA）₂免疫后能有效减少感染鸡只的排毒时间以及排毒量,在应对H7N9 AIV的变异以及流感大流行方面具有重要意义。