副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是当前主要影响集约化养猪业发展的细菌病之一。HPS可引起病猪的多器官病变,且易与多种细菌病及病毒病混合感染,大大加剧了病猪的死亡率。副猪嗜血杆菌病因出现严重的耐药情况,难以依靠药物来控制其传播和发生,再加上现有商业化疫苗因不同菌型抗原交叉免疫原性低,还没有一种疫苗能对所有血清型均产生有效的免疫保护。所以,为了控制HPS的发生和流行,部分研究者正在开发亚单位疫苗来对HPS进行免疫预防。本验对HPS的LolA、thyA重组蛋白进行免疫活性鉴定,应用原核表达系统对HPS的LolA、thyA分泌蛋白进行表达获取、纯化,同时利用昆明小鼠模型鉴定重组蛋白的免疫效果。结果显示:(1)通过与Gene Bank所有10株HPS菌株序列BLAST比对发现,LolA和thyA基因在HPS菌株中均保守存在;(2)收获纯化后的重组蛋白LolA和thyA,并通过His标签抗体和13型HPS阳性血清的western-blot筛选,获得与目的大小一致的片段;(3)通过抗体Ig G的检测发现,灭活组较阴性对照组显著升高(p<0.05),而重组蛋白LolA、重组蛋白thyA及二者混合蛋白组Ig G水平较阴性对照组极显著升高(p<0.01);说明重组蛋白LolA、thyA及二者混合蛋白组能够刺激小鼠产生特异性抗体Ig G,且优于全菌灭活组。(4)重组蛋白LolA较空白组及阴性对照组比较IL-4细胞因子水平极显著升高(p<0.01),IFN-γ、IL-10水平显著升高(p<0.05);而混合蛋白细胞因子IFN-γ、IL-4极显著高于空白组及阴性对照组(p<0.01),IL-10亦升高显著(p<0.05)。(5)重组蛋白thyA IL-4、IL-10水平较空白组及阴性对照组显著升高(p<0.05),且高于全菌灭活组。由此认为,重组蛋白LolA、混合蛋白LolA、thyA能在在一定程度上刺激机体产生Th1和Th2免疫反应,而重组蛋白thyA、全菌灭活组仅对Th2免疫反应产生一定作用。(6)重组蛋白LolA免疫后可对致死剂量的13型HPS能够提供50%的保护率,混合蛋白LolA和thyA仅能提供40%的保护率,说明重组蛋白LolA、混合蛋白LolA、thyA对13型HPS具有一定的保护力,可以作为新的疫苗候选抗原,为研制安全、高效的副猪嗜血杆菌新型亚单位疫苗奠定基础。