论文部分内容阅读
慢性胃炎(Chronic gastritls,CG)是由多种原因引起的胃粘膜慢性炎症性病变。慢性胃炎分为浅表性胃炎(CSG)和萎缩性胃炎(CAG)两大类。浅表性约占慢性胃炎51.7-85.45%,萎缩性约占10.07-32%。浅表性胃炎若迁延不愈,可使胃的固有腺体因炎症破坏而减少,继而转化为萎缩性胃炎,而萎缩性胃炎为胃癌前病变,因此,积极治疗慢性胃炎,对于阻止其向CAG的发展及胃癌演变具有非常重要意义,目前,西医对慢性胃炎只能对症治疗,但效果不理想,且易复发,而中药在慢性胃炎的辨证治疗、改善和控制症状、预防复发等方面都有着独特优势和潜力。安胃丸是在几十年的临床实践中总结出来的经验方,在治疗慢性胃炎方面疗效肯定。为进一步证实其疗效并探讨其作用机理,为其临床提供科学的实验依据,我们进行了实验研究。本研究主要集中从分子、基因水平讨论该方治疗大鼠慢性胃炎的作用机制。目的:建立大鼠慢性胃炎模型,从分子、基因水平深入探讨安胃丸对CG大鼠血清细胞因子、胃粘膜NF-kBp65 mRNA和细胞增殖调控蛋白表达的影响,从而进一步阐释其作用机制。方法:应用60%酒精、20mmol/L去氧胆酸钠灌胃和0.05%～0.1%氨水自由饮用,并结合饥饱失常13周复制大鼠CG模型,给予安胃丸治疗30天,从大体标本和光镜病理方面观察安胃丸对CG大鼠胃粘膜形态学的影响;运用阿尔新蓝、酸碱滴定等方法测定胃液中游离粘液含量、胃游离酸(FA)和总酸(TA)含量及胃蛋白酶活性;采用免疫组织化学方法检测安胃丸对CG大鼠胃粘膜细胞增值的影响;应用原位杂交技术检测经安胃丸治疗后CG大鼠胃粘膜核因子-kB p65 mRNA表达表达变化;运用ELISA法测定CG大鼠血清胃泌素、生长抑素、表皮生长因子、肿瘤坏死因子-α、白介素-2、白介素-4含量的变化。结果:1、模型:采用60%酒精和20mmol/L去氧胆酸钠,0.05%～0.1%氨水并结合饥饱失常对SD大鼠连续刺激12周,经病理检查发现模型组大鼠胃窦黏膜糜烂、大量炎细胞浸润,炎症指数明显高于空白组(P<0.01),胃窦粘膜腺体厚度变薄不明显,模型组L1/L2与空白组比较无变化(P>0.05),成功建立CG模型。2、病理组织学:安胃丸高、中剂量组和胃乃安组胃黏膜病理改变减轻,炎细胞浸润减少,粘膜炎症评分显著低于模型组(P<0.05)。各组胃黏膜腺体厚度(L1)与黏膜肌层厚度(L2)之比(L1/L2)与模型组之间无明显差别(P>0.05)。3、胃液生化:模型组胃液游离酸度、总酸度、游离粘液含量、胃蛋白酶活性均显著高于空白组(P<0.01),安胃丸三个剂量组和胃乃安组均能显著降低胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性,其中,安胃丸低剂量与胃乃安组相比无明显差异,安胃丸高、中剂量组能降低游离粘液含量,而胃乃安组对此无明显影响。4、免疫组化:模型组大鼠胃窦粘膜增殖细胞核抗原和表皮生长因子受体的表达均明显高于空白组(P<0.05),安胃丸高、中剂量和胃乃安组均能不同程度降低PCNI和EGFR的表达,其中,安胃丸中剂量与胃乃安组相当,二者无明显差异(P>0.05)。5、原位杂交:正常组仅部分细胞浆呈棕色,模型组细胞浆p65mRNA 阳性信号(棕色)表达明显增加,且分布不均,光密度值和阳性面积率明显高于正常组(P<0.01),安胃丸高、中剂量组和胃乃安组阳性表达明显减少,NF-kB p65mRNA的光密度值和阳性面积率(%)均明显低于模型组(P<0.01)。6、ELISA:模型组大鼠血清胃泌素和表皮生长因子均显著增高(P<0.01),生长抑素无明显变化(P>0.05);模型组血清TNF-α和IL-2水平增高,IL-4水平降低。安胃丸高、中剂量和胃乃安组能降低大鼠胃泌素含量;安胃丸中剂量能降低表皮生长因子含量;安胃丸各剂量及胃乃安组对生长抑素无明显影响。安胃丸高、中剂量和胃乃安组能降低TNF-α含量;安胃丸三个剂量和胃乃安组均能显著提高IL-4水平,安胃丸中剂量还能降低IL-2水平。结论:1、安胃丸高、中剂量能减轻CG大鼠胃粘膜的炎症程度,且安胃丸和胃乃安组的作用差异不显著。而二者对胃粘膜腺体层与粘膜肌层厚度比值均无影响。2、安胃丸能显著降低胃液游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性,其中,胃乃安组与安胃丸低剂量作用相当。安胃丸高、中剂量可以降低游离粘液含量,低剂量和胃乃安组对游离粘液含量无明显影响。3、安胃丸和胃乃安组均能不同程度降低PCNI和EGFR的表达,其中,安胃丸中剂量与胃乃安组相当,二者无明显差异(P>.05)。4、安胃丸中、高剂量和胃乃安组能使NF-kB p65mRNA 阳性表达明显细胞减少,NF-kB p65mRNA的光密度值和阳性面积率(%)均降低。5、安胃丸能抑制胃泌素释放,降低表皮生长因子的含量,而胃乃安组对胃泌素和表皮生长因子无明显影响。安胃丸和胃乃安组均可降低TNF-α含量,提高IL-4水平,安胃丸还能够降低IL-2水平,调节IL-4/IL-2比例,使其达到平衡。