近年来，聚合物因其优异的可设计性和良好的生物相容性等特点作为药物输送载体备受关注。研究表明，灵芝是一种著名的传统中草药，从灵芝中提取的生物活性物质灵芝酸T(GA-T)具有显著的抗肿瘤作用。然而，因其难溶于水限制了其应用。本文应用分子自组装技术构建了两类水分散性良好的灵芝酸T聚合物纳米胶束，研究了其分别对人肺癌95-D细胞、人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌HepG2细胞的抑制效果，并对其抗肿瘤机制进行了研究。本研究报告的主要研究内容和结论如下:　　 1.超支化聚乙二醇/灵芝酸T纳米胶束的构建及其对人肺癌95-D细胞的作用机制研究　　 我们用二丙烯酸寡聚乙二醇酯(PEG-DA)和1，8-二氨基-3，6-二氧杂辛烷(EOBEA)进行迈克尔加成聚合，再用二乙胺封端过量的双键，得到阳离子型超支化聚乙二醇(HPEG)。用核磁共振(NMR)和傅立叶变换红外光谱(FTIR)对HPEG的结构进行了表征。　　 用MTT法评估了HPEG对小鼠成纤维细胞(NIH-3T3细胞)的细胞毒性，结果表明，2 mg/mL的HPEG作用于NIH-3T3细胞24小时，NIH-3T3细胞的存活率为65％，说明HPEG具有很低的细胞毒性。借助流式细胞术和激光共聚焦显微镜进行细胞内摄观察，发现HPEG仅需5分钟就可进入人肺癌95-D细胞。　　 进一步采用分子自组装技术构建了超支化聚乙二醇/灵芝酸T(HPEG/GA-T)纳米胶束。动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)观察表明，HPEG/GA-T纳米胶束的粒径小于200 nm，适宜作为药物输送系统。MTT检测表明，GA-T浓度为50μg/mL的HPEG/GA-T纳米胶束作用于人肺癌95-D细胞24小时，人肺癌95-D细胞的死亡率为93％，HPEG/GA-T纳米胶束能够显著抑制人肺癌95-D细胞的生长。Hoechst33342染色法检测表明，GA-T浓度为50μg/mL的HPEG/GA-T纳米胶束作用于人肺癌95-D细胞16小时，诱导人肺癌95-D细胞凋亡。上述结果表明，HPEG/GA-T纳米胶束诱导人肺癌95-D细胞早期凋亡。　　 2.聚乙二醇-b-聚己内酯/灵芝酸T纳米胶束的构建及其对人宫颈癌HeLa细胞的作用机制研究　　 用辛酸亚锡作催化剂，以聚乙二醇(PEG)引发ε-己内酯(ε-CL)开环聚合，合成了聚乙二醇与聚己内酯的两嵌段聚合物(PEG-b-PCL)。用核磁共振(NMR)和傅立叶变换红外光谱(FTIR)对PEG-b-PCL的结构进行了表征。采用MTT实验评估了PEG-b-PCL对小鼠成纤维细胞（NIH-3T3细胞）的细胞毒性。实验结果表明，1 mg/mL的PEG-b-PCL作用于NIH-3T3细胞24小时，NIH-3T3细胞的存活率为85％，PEG-b-PCL具有很低的细胞毒性。　　 进一步采用分子自组装技术构建了PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束，透射电镜观察表明，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束的平均粒径为95 nm，很适宜作为药物输送系统。MTT检测表明，GA-T浓度为50μg/mL的PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束作用于人宫颈癌HeLa细胞48小时，HeLa细胞的死亡率为98％，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束能够有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长。Hoechst33342染色法检测表明，GA-T浓度为50μg/mL的PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束作用于人宫颈癌HeLa细胞24小时，诱导了人宫颈癌HeLa细胞凋亡。上述结果表明，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束诱导人宫颈癌HeLa细胞早期凋亡。　　 用真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL转染HeLa细胞，结果表明TRAIL诱导HeLa细胞凋亡。以上实验结果为进一步将TRAIL与PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束联合应用于HeLa细胞奠定了基础。　　 3.聚乙二醇-b-聚己内酯/灵芝酸T纳米胶束对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究　　 采用MTT实验评估了PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束对人肝癌HepG2细胞的抑制效果，实验结果表明，GA-T浓度为50μg/mL的PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束作用于人肝癌HepG2细胞48小时，HepG2细胞的死亡率为66％，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束对人肝癌HepG2细胞的生长抑制率较低。Hoechst33342染色法检测表明，GA-T浓度为50μg/mL的PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束作用于人肝癌HepG2细胞24小时，不诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。用PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束处理稳定表达GFP-LC3的人肝癌HepG2细胞36小时可观察到，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束诱导人肝癌HepG2细胞发生细胞自噬。上述结果表明，PEG-b-PCL/GA-T纳米胶束诱导人肝癌HepG2细胞自噬性细胞死亡。