枇杷根际微生物多样性及促生作用研究

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枇杷是我国重要的亚热带水果,产量居世界前列。枇杷不仅营养丰富,还具有消炎抗菌、美白、抗氧化和抑制癌细胞生长等功效。随着经济的发展,为了提高枇杷产量,果农使用化肥和农药的现象屡见不鲜。化肥和农药的大量使用不仅对枇杷质量有影响,而且对枇杷根际环境同样有较大影响。福建省莆田市是我国枇杷的重要种植区,但不科学的施肥和管理方式,导致土壤酸化、土壤板结等问题出现,这阻碍了枇杷产业的健康可持续发展。本研究以不同施肥量的根际土壤、枇杷叶片和枇杷果实为研究对象,利用高通量测序技术分析了枇杷根际土壤微生物多样性,并研究了不同施肥量对枇杷根际细菌和真菌群落结构和丰度的影响。利用平板涂布法筛选了枇杷土壤、枇杷叶片和枇杷果中优势菌及促生菌,并利用16S r DNA测序技术和生理生化试验进行了鉴定。主要研究结果如下:1、不同施肥量对枇杷根际细菌群落结构和丰度的影响研究基于高通量测序技术分析了4个不同处理的12份枇杷根际土壤样品,共得到43058个细菌OTU(operational taxonomic units),分为31个门和617个属;共有12个优势门(除去未分类的,丰度>1%),25个优势属(除去未分类的,丰度>1%)。优势菌门随化肥用量的增加而减少;其中4个处理中共有的优势门有变形杆菌门(Proteobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌(Actinobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和绿弯菌门(Chloroflexi)。不同处理的优势菌属差异较大,随着化肥用量的增加优势菌属硝化螺菌属(Nitrospira)、WPS-1_genera_incertae_sedis、鞘脂单孢菌属(Sphingomonas)、罗河杆菌属(Rhodanobacter)、Pseudolabrys、Nitrososphaera、Gp7、出芽菌属(Gemmata)、Latescibacteria_genera_incertae_sedis消失,而马赛菌属(Massilia)、鸟氨酸芽胞杆菌属(Ornithinibacillus)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Rhizomicrobium、节杆菌属(Arthrobacter)和假单胞菌属(Pseudomonas)成为新的优势菌属。优势菌门和属的丰度在不同处理的根际土壤中存在明显差别。土壤细菌群落和主要理化性质存在显著相关性,其中p H、全氮、有效磷和总磷是影响土壤细菌丰富度的主要因素。2、不同施肥量对枇杷根际真菌群落结构和丰度的影响研究基于高通量测序技术分析4个处理12份枇杷根际土壤样品,共得到9383个真菌OTU(operational taxonomic units),分为17个门和494个属;共有6个优势门(除去未分类的,丰度>1%),25个优势属(除去未分类的,丰度>1%)。4个处理共有的优势菌门是子囊菌门(Ascomycota)、被孢菌门(Mortierellomycota)、unclassified_Fungi和担子菌门(Basidiomycota)。随着施肥量增加,被孢菌门(Mortierellomycota)和罗兹菌门(Rozellomycota)的丰度增加;而子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)和球囊菌门(Glomeromycota)丰度减少。不同处理的优势菌属差异同样较大,2个优势菌真属被孢霉属(Mortierella)和轮枝菌属(Verticillium)随着施肥量增加丰度增加,而有18个优势属镰孢属(Fusarium)、柱孢霉属(Cylindrocarpon)、癣囊腔菌属(Plectosphaerella)、Saitozyma、斜盖伞属(Clitopilus)、锥毛壳属(Coniochaeta)、Knufia、Heterophoma、枝顶孢属(Acremonium)、Apiotrichum、Archaeorhizomyces、假裸囊菌属(Pseudogymnoascus)、unclassified_GS33、unclassified_Ascomycota、unclassified_Sordariomycetes、unclassified_Eurotiomycetes、unclassified_Chaetomiaceae和unclassified_Nectriaceae消失。土壤真菌群落和主要理化性质存在显著相关性,其中p H、全氮、有效磷、总磷和速效钾是影响土壤真菌丰富度的主要因素。3、枇杷根际土壤、叶片和果实中优势菌及促生菌的筛选和鉴定利用平板涂布法从枇杷根际土壤筛选到贪铜菌属(Cupriavidus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、Caballeronia、伯克霍尔德菌属(Burkholderia)、类伯克霍尔德菌属(Paraburkholderia)、罗尔斯顿菌属(Ralstonia)、不动菌属(Acinetobacter)、红球菌属(Rhodococcus)、节杆菌属(Arthrobacter)、嗜冷芽胞杆菌属(Psychrobacillus)、戈登氏菌属(Gordonia)12个属。叶片内生菌有芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、类芽孢杆菌(Paenibacillus)、鞘脂单胞菌属(Novosphingobium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、杆菌属(Bacterium)6个属。果实内生菌有Rouxiella、克洛诺菌属(Cronobacter)、勒克氏菌属(Leclercia)、芽孢杆菌(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、泛菌属(Pantoea)6个属。共筛选到固氮菌58株,解磷菌38株,解钾菌32株,产蛋白酶菌49株;其中功能较好的细菌有18株,为假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)和伯克霍尔德菌属(Burkholderia)。
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