【摘 要】
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)引起的水稻黑条矮缩病是当前水稻、玉米上的最重要病毒病之一,其分布在我国十分广泛。RBSDV S6编码的P6蛋白已报道
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)引起的水稻黑条矮缩病是当前水稻、玉米上的最重要病毒病之一,其分布在我国十分广泛。RBSDV S6编码的P6蛋白已报道为基因沉默抑制子。本文采用RT-PCR扩增江苏和福建水稻RBSDV分离物,将RT-PCR扩增产物与克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α并测序。对测序结果分析表明:江苏水稻分离物为水稻黑条矮缩病毒;福建水稻病株分离物含有水稻黑条矮缩病毒及南方水稻黑条矮缩病毒。采用酵母双杂交系统对P6进行研究。将江苏分离物扩增产物分别与酵母表达载体pGADT7及pGBKT7连接,构建重组子pGADT7-S5A、pGADT7-S8、pGADT7-S9-1、pGADT7-S9-2及pGBKT7-S6。蛋白间相互作用情况显示:未检测到pGBKT7-S6与pGADT7-S5A、pGADT7-S8、pGADT7-S9-1、pGADT7-S9-2间相互作用,表明P6与S5A、S8、S9-1、S9-2编码蛋白可能不存在互作。利用酵母双杂交系统以pGBKT7-S6为诱饵筛选水稻幼苗叶片cDNA文库,获得4个阳性克隆:SR-1、SR-2、SR-3及SR-4。将筛选到的阳性克隆在GenBank数据库或TIGR Rice Genome Annotation数据库中进行blast比对,寻找同源序列。根据同源基因的注释及前人对同源基因的研究可知:与SR-1高度同源的水稻蛋白功能还不清楚,与SR-2、SR-3、SR-4同源的蛋白分别为水稻内囊体抗坏血酸氧化酶(thylakoid-bound APX, tAPX)、突变(immutans)蛋白、醛糖1差向异构酶(aldose 1-epimerase,A1EP)。初步推测筛选到的4个蛋白可能是水稻不同代谢过程中的酶,其在水稻的正常生理过程中发挥着重要作用。病毒侵染后将可能导致寄主的一些代谢途径发生变化。
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