【摘 要】
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染有核细胞的顶复门类寄生原虫。人畜食入被弓形虫卵囊或包囊污染/感染的食物从而感染弓形虫疾病,在中间宿主体内以二分裂的方式进行繁殖。弓形虫病可以引起孕妇及妊娠母畜流产、死胎等症状。猪感染弓形虫可造成60%死亡率。近年来,随着弓形虫感染率的不断上升,筛选有效抗弓形虫药物靶标成为亟待解决的问题。钙离子作为第二信使参与多种途径的调控,前期研究发现
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染有核细胞的顶复门类寄生原虫。人畜食入被弓形虫卵囊或包囊污染/感染的食物从而感染弓形虫疾病,在中间宿主体内以二分裂的方式进行繁殖。弓形虫病可以引起孕妇及妊娠母畜流产、死胎等症状。猪感染弓形虫可造成60%死亡率。近年来,随着弓形虫感染率的不断上升,筛选有效抗弓形虫药物靶标成为亟待解决的问题。钙离子作为第二信使参与多种途径的调控,前期研究发现弓形虫体内存在钙调蛋白家族、钙依赖性蛋白激酶和类钙调神经神经素B亚基蛋白,钙离子结合蛋白家族中的某些钙调蛋白质可以与弓形虫体内的Myosin H(Myo H)蛋白质相互作用,两者的作用参与了弓形虫的运动和入侵宿主细胞等生理活动。本课题首先对弓形虫基因组序列进行生物信息学分析和预测发现:Putative Calcium Binding Protein(TGME49＿229480)在不同毒力虫株间具有高度保守性,且含有多个钙离子结合结构域,与报道的钙调蛋白质在结构上有高度的相似性。由此提出科学问题:pCaBP是否能与弓形虫肌球蛋白质(Myosin H,Myos H)发生结合,该蛋白质在虫体入侵宿主细胞的过程中发挥了怎样的作用?就此,本课题对其功能进行了深入性研究。通过原核表达载体分别构建了含有HIS及GST标签的两种重组表达质粒,并诱导表达、纯化了相应的重组蛋白质。通过间接免疫荧光发现,pCaBP在RH株及ME49株虫体内表达,该蛋白质均分布在虫体的细胞浆内;通过Western-Blot及Real-Time PCR检测发现,该蛋白质在不同虫株中的转录和表达水平存在差异性,毒力较强的RH株的表达水平偏低;通过分子互作实验发现,弓形虫中Myo H蛋白质与虫体内pCaBP发生结合,以上实验为进一步研究pCaBP功能奠定基础。
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