磺丁基醚-β-环糊精（SBE-β-CD）是一种高水溶性的β-环糊精（β-CD）衍生物，能与药物形成非共价键包合物，从而提高药物的溶解性、稳定性、安全性和生物利用度，并能掩盖药物的不良气味。与β-CD相比，其具有更好的水溶性，且溶血作用小、肾毒性低，是一种应用前景非常广阔的新型药用辅料。SBE-β-CD是由1，4-丁烷磺内酯（1，4-BS）在碱性条件下与β-CD的2，3，6位碳上的羟基发生取代反应而得到的。由于β-CD是由7个吡喃葡萄糖通过α-（1、4）糖苷键连接而成，有21个可能发生取代反应的位点，因此通过该反应所得到的产物是非常复杂的混合物。20世纪90年代，美国Cydex公司开发出了取代度（degree of substitution，DS）为7的SBE₇-β-CD，商品名为Captisol。而我国起步较晚，仍处于研发阶段，尚未有商品上市。本实验旨在建立SBE₇-β-CD的杂质检查、组分分析、平均取代度和含量测定等分析方法，以有效控制其质量。进行了以下几方面的研究：分离、纯化和制备SBE₇-β-CD各单取代组分，在此基础上，通过毛细管电泳-间接紫外检测法对其进行组分分析，并测定其平均取代度；对SBE₇-β-CD中3种主要杂质进行定量测定，分别建立杂质1,4-丁烷磺内酯（1,4-BS）的气相色谱测定方法和4-羟基丁磺酸钠、二磺烷基化醚钠同时定量的高效液相色谱质谱联用（HPLC-MS）测定方法；采用高效液相凝胶色谱-示差折光检测技术对SBE₇-β-CD进行含量测定。该研究为SBE₇-β-CD质量标准的制定奠定了基础，为其生产工艺的确定提供了有力的技术支持。第一部分SBE₇-β-CD单一取代组分的分离和制备目的：分离、纯化和制备SBE₇-β-CD单一取代组分，确证其取代度。方法：采用DEAE SephadexA-25葡聚糖凝胶为填料，玻璃砂芯色谱柱（29cm×4cm）为填装柱，自制分离柱，通过硫酸钠浓度梯度（0¹.4mol/L）洗脱对SBE₇-β-CD进行分离，得到单一取代组分。采用SephadexG-25葡聚糖凝胶为填料，玻璃砂芯色谱柱（40cm×18mm）为填装柱，自制脱盐柱，通过去离子水的洗脱将各单一取代组分脱盐纯化。分别采用核磁共振波谱法和质谱法对得到的各单一取代组分进行取代度的测定。结果：共得到6种SBE₇-β-CD单一取代组分，其取代度分别为3、4、5、6、7、8。核磁共振波谱法和质谱法取代度检测结果一致。结论：本实验成功分离、纯化和制备了6种SBE₇-β-CD单一取代组分，为SBE₇-β-CD的组分分析和平均取代度的测定奠定了物质基础。第二部分SBE₇-β-CD的高效毛细管电泳-间接紫外法组分分析和平均取代度测定目的：建立SBE₇-β-CD的组分分析和平均取代度测定方法。方法：采用高效毛细管电泳-间接紫外检测分析方法。未涂层熔融石英毛细管柱（60.2cm×50μm×50cm）；运行缓冲液30mmol/L苯甲酸-Tris缓冲液（pH7.5）；温度25℃；压力进样6s（0.5psi）；分离电压30kV；检测波长214nm，间接检测模式。平均取代度的计算：通过比较校正峰面积百分比对各单取代组分进行组分分析。采用所建立的方法对11批供试品进行了测定，并与美国药典论坛（PharmacopoeiaForum，PF）规定的标准进行比较。结果：SBE₇-β-CD中各组分的分离度符合要求，峰形和基线良好；该方法精密度和重复性良好，供试品溶液在8h内基本稳定；SBE₇-β-CD中检测到取代度分别为2¹1的10种单取代组分，11批SBE₇-β-CD供试品的平均取代度为6.7⁶.9，符合PF中的规定，但其组分分析结果与PF的标准规定有一定的差异。结论：该方法准确、快速、分析成本低，能够评价不同批次供试品的差异，为SBE₇-β-CD合成工艺的改进提供了帮助。第三部分毛细管气相色谱法测定SBE₇-β-CD中杂质1,4-丁烷磺内酯目的：建立SBE₇-β-CD中的杂质1,4-BS的测定方法。方法：采用气相色谱法。色谱柱：DB1701（30m×0.32mm×0.25μm，Agilent Technologies）；氢火焰离子化检测器；载气为氮气（纯度99.999%），燃气为氢气，助燃气为空气；载气流速30ml/min；进样口温度为200℃；柱温为程序升温：初始温度100℃，以10℃/min的升温速率升到200℃，恒温0min，再以30℃/min的升温速率升到260℃，恒温3min；检测器温度为270℃；柱前压为9.9psi；分流比为10:1；进样1μl。采用二乙砜作为内标。供试品处理：取SBE₇-β-CD供试品约0.2g，精密称定，置10ml离心管中，精密加入水1ml，涡旋溶解，再精密加入二氯甲烷1ml，涡旋1min，静置分层，取有机相，进样分析，以标准曲线法计算含量。结果：二乙砜与1,4-BS的保留时间分别为6.131min和8.615min，分离度远大于1.5；1,4-BS的检测限为0.1126ng，定量限为0.2599ng；1,4-BS在2.984μg/ml⁸.952μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9989）；仪器精密度（n=9）的RSD为4.7%；高、中、低三种浓度的加样回收率分别为101.5%、99.3%、100.3%，精密度分别为1.6%、1.2%、1.2%；1,4-BS高、中、低三种浓度的平均萃取率分别为68.7%、68.4%、70.0%，RSD分别为15.2%、23.5%、17.4%；二乙砜高、中、低三种浓度的平均萃取率分别为56.1%、57.7%、52.8%，RSD分别为18.8%、24.8%、13.9%。结论：本实验所建立的方法简单、快速、准确，灵敏度可满足检测要求，避免了PF规定的标准加入法的繁琐计算，可作为SBE₇-β-CD中的杂质1,4-BS的有效检测方法。第四部分高效液相离子对色谱-液质联用同时测定SBE₇-β-CD中杂质4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠目的：建立SBE₇-β-CD中的杂质4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的测定方法。方法：采用高效液相离子对色谱-液质联用法。色谱柱：ODS-SPC18（4.6×250mm，5μm，GL Sciences Inc. Inertsil），柱温为30℃；流动相：甲醇-10mmol/L正戊胺水溶液（pH5.45）（30:70）；流速1.0ml/min，进样量10μl。离子源：电喷雾离子（ESI）源；检测方式：多反应监测（MRM）模式；负离子监测模式。4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的监测离子对分别为m/z153.0/79.8和m/z289.0/152.9。结果：4-羟基丁磺酸钠与二磺烷基化醚钠的保留时间分别为3.41min和4.24min，能够完全分离；4-羟基丁磺酸钠的检测限为0.005294ng，定量限为0.01018ng，定量限的回收率在101.9%¹08.8%之间，RSD为3.4%；二磺烷基化醚钠的检测限为0.02054ng，定量限为0.03950ng，定量限的回收率在97.3%¹07.8%之间，RSD为4.0%；4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠分别在1.018ng/ml³.583ng/ml和3.950ng/ml¹3.90ng/ml范围内线性关系良好，r分别为0.9997和0.9996；方法精密度（n=6）的RSD不大于3.8%；加样回收率（n=6）为95.4%⁹6.2%，RSD不大于4.2%；仪器精密度（n=6）的RSD不大于3.5%。结论：该方法专属性强、灵敏度高，是一种新的4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的检测方法，同时也为其他烷基磺酸钠盐化合物的分析提供了参考。第五部分高效液相凝胶色谱-示差折光检测法测定SBE₇-β-CD的含量目的：建立SBE₇-β-CD的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。Phenomenex PolySep-GFC-P3000凝胶柱，柱温35℃；示差折光检测器，检测温度35℃；流动相：乙腈-0.1mol/L硝酸钾水溶液（35:65），流速1.0ml/min；进样量10μl。结果：SBE₇-β-CD的保留时间为6.8min，主峰与相邻杂质峰的分离度均不小于1.94；方法的检测限为0.32μg，定量限为0.48μg；SBE₇-β-CD在0.4985mg/ml¹.495mg/ml范围内线性关系良好（r=0.9998）；方法精密度（n=6）的RSD为1.4%；平均回收率（n=6）的平均值为98.0%，RSD为1.3%；6批供试品的含量均在95.8%⁹9.3%之间。结论：该方法准确度和重复性良好，适合SBE₇-β-CD的含量测定，为SBE₇-β-CD质量标准的建立奠定了基础。