鱼粉和豆粕氨基酸快速测定方法研究

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随着水产养殖向集约化、工厂化方向发展,水产动物生长条件受到人类完全控制,其生长所需的一切条件均需人为提供,即水产配合饲料必须提供其所需的所有氨基酸。为保证饲料中各种氨基酸的合理搭配及配方的及时调整,需准确进行其氨基酸的测定分析。目前,国家标准的饲料氨基酸测定方法需要将饲料中的蛋白质用精确体积的6mol/L盐酸在110℃的烘箱中密闭水解20-24h(体积不能减少),冷却混匀后定量移取一部分氨基酸水解溶液,以不高于60℃的温度减压蒸干,再用精确体积复溶后用专用氨基酸分析仪测定。含硫氨基酸的氧化酸水解法还要在水解之前用过甲酸氧化剂在冰水浴中氧化处理16-18h。相对与其他常规营养指标的测定指标来说,饲料中氨基酸测定的周期较长、操作步骤较多、能源消耗较大、安全风险略高,成为限制其运用的瓶颈因素之一。针对以上问题,本研究运用微波前处理系统针对饲料氨基酸测定方法中的蛋白质水解过程进行改进以简化检测流程、缩短检测周期,并对测定结果进行评估。此外,本研究还建立了鱼粉和豆粕的17种氨基酸指标的近红外综合扫描预测模型,希望通过近红外扫描的快速分析方法在短时间内一次性对以上指标完成测定。本研究主要内容有:1.微波水解法在鱼粉和豆粕氨基酸测定中的应用研究在鱼粉和豆粕氨基酸测定前处理中的蛋白质水解过程中,采用微波水解对常规酸水解、氧化酸水解和碱水解三种水解方法进行了研究和尝试。通过对水解温度、水解时间参数的设定和优化,并以压力监测为辅助观察手段,得出了微波辅助水解蛋白质的最佳条件为:样品充分润湿后,与氧气隔离,在完好密闭的环境中用20min加热至160℃并保持20min。观察到的最高压力通常在5-8 bar左右。这一过程的结果与传统水解法20~24h基本一致。该条件也适用于氨基酸的氧化酸水解和碱水解,其中氧化水解的16-18h冰水浴氧化条件可以用55℃水浴30min代替。2.近红外分析法在鱼粉和豆粕氨基酸测定中的应用研究运用湿化学分析数据,建立了国产鱼粉的在FOSS TR3750近红外光谱仪上的17种氨基酸预测模型-国产鱼粉2019(暂不含色氨酸),以及BLUKER MPA近红外光谱仪上进口鱼粉和豆粕样品的17氨基酸预测模型。对Foss马氏距离小于3、布鲁克马氏距离小于1的样品得出的扫描预测结果与常规氨基酸测定的结果偏差小于0.15,符合GB/T18868的偏差要求。以上结果表明,蛋白质微波辅助水解方法,在不影响最终结果的前提下,将鱼粉和豆粕氨基酸测定的周期相对国家标准检测方法至少缩短了24小时左右,并简化了氨基酸测定的前处理操作。对鱼粉氨基酸微波酸水解法测量不确定度评定的结果证明测定其结果质量处于受控状态并且测量不确定度符合测定结果偏差的要求。近红外分析则可对符合模型要求的特定样品快速给出鱼粉和豆粕17种氨基酸的准确预测结果。研究表明,微波水解方式和近红外分析法的运用可以大大提高饲料氨基酸指标测定的效率,有利于水产饲料及其原料氨基酸测定的普及和精准配方的设计。
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