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1-脱氧野尻霉素(DNJ)是桑叶中一种独特的多羟基生物碱,具有很强的降血糖活性,是桑叶降血糖的主要活性成分,可用于治疗糖尿病。现代药理学表明,DNJ还具有降血脂、抗病毒、抗癌及减肥等多种功效,在临床治疗糖尿病及分子生物学研究等方面具有重要应用价值。本文主要研究了桑叶中DNJ的定性定量检测、提取工艺、分离纯化技术,以期找到合适的方法来获得较高纯度的DNJ样品,为未来DNJ的开发和应用提供理论基础。1.确定DNJ的TLC定性分析条件。对比了几种常用的定性检测生物碱的显色剂和展开剂,采用薄层色谱检测法,对DNJ进行检测。实验结果发现,以正丁醇:醋酸:水(4:1:1)为展开剂,氯-邻联甲苯胺为显色剂,DNJ在薄板上的展开效果最好。该方法分离效果良好,DNJ斑点圆整、清晰,可用于DNJ的快速定性分析和检测。2.由于DNJ是小分子哌啶类生物碱,极性较强,结构类似于单糖且水溶性好,常用的C18柱不适合对其进行检测。本实验采用氨基柱为色谱柱,芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生化法进行柱前衍生,高效液相色谱-紫外检测器进行检测。标准曲线的线性相关系数R2=0.9897,表明DNJ在5~50μg/mL浓度范围内线性关系良好。从稳定性、精密度、重现性和加样回收试验的测定结果来看,该方法是稳定可靠的,可作为测定桑叶中DNJ含量的有效方法。3.通过单因素试验和响应面试验设计法对超声-表面活性剂辅助提取桑叶中DNJ的提取工艺进行优化,得到最佳提取条件为:超声时间为32min、料液比为10mL/g、提取温度为73℃、表面活性剂浓度为2.1%,在此条件下DNJ的提取量为0.996mg/g,提取量为83%。在最佳条件下,比较回流提取法、超声-回流提取法和超声-表面活性剂辅助提取法对桑叶中DNJ的提取效果。4.本实验综合运用了D72型阳离子交换树脂、D296型阴离子交换树脂和中性氧化铝柱层析,对从桑叶中提取得到粗提物进行分离纯化,并利用HPLC和HPLC-MS对纯化后的提取物进行检测和分析,得到纯度较高的DNJ提取物。