CO2对卵巢癌细胞株SKOV3 Survivin、PCNA、CD44v6表达及对顺铂敏感性的影响

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研究背景:腹腔镜手术与传统的开腹手术比较,具有创伤小、疼痛轻、恢复快、住院时间短等优点,目前已成为治疗良性妇科疾病的重要术式。随着腹腔镜技术和设备的不断发展,其逐渐应用到恶性肿瘤领域。腹腔镜技术用于恶性肿瘤的安全性,特别是术后出现穿刺点种植和腹腔肿瘤转移、播散,这一问题已引起人们广泛关注,并为此进行深入研究,研究结果也不尽一致。二氧化碳(CO2)气腹引起肿瘤复发及转移的机制亦众说纷纭,分别从酸中毒、免疫损伤、机械物理损伤、转移因子、黏附分子等方面阐述。但是从细胞及分子水平研究CO2作用后对化疗药物敏感性的报道很少。目的:探讨模拟CO2气腹环境对卵巢癌细胞株SKOV3 Survivin、PCNA、CD44v6 mRNA和蛋白表达的影响,为CO2气腹腹腔镜手术在恶性肿瘤中应用的安全性作出评价,并研究CO2作用后SKOV3细胞对顺铂敏感性变化。方法:人卵巢癌细胞株SKOV3置于37℃、含5%CO2细胞培养箱内培养,传2-3代后,取处于对数生长期SKOV3细胞,以2.0×105/ml密度接种至50ml塑料培养瓶内,于细胞培养箱内培养24小时贴壁。细胞分4组:对照组、顺铂(DDP)组、CO2组、CO2+DDP组。对照组继续常规培养72小时。DDP组细胞继续培养24小时后换用含10μg/ml顺铂的培养液。CO2组细胞置于无菌引流袋内,密闭后用无菌引流管接于气腹机上,将气腹机压力调至12mmHg通入CO2气体,持续作用3小时,然后置于细胞培养箱内继续培养72小时。CO2+顺铂组在上述CO2处理后24小时换用含10μg/ml顺铂的培养液,置于细胞培养箱内继续培养48小时。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及免疫细胞化学法检测各组细胞Survivin、PCNA、CD44v6 mRNA和蛋白的表达。实验重复5次,应用统计软件SPSS13.0对所得数据进行分析,统计方法为析因设计方差分析和t检验,P<0.05为差异有显著性。结果:析因设计方差分析结果表明,模拟CO2气腹环境和顺铂对SKOV3细胞Survivin、PCNA、CD44v6 mRNA和蛋白表达的影响无交互作用(P>0.05),二者的作用相互独立,互不影响,表明CO2作用后SKOV3细胞对顺铂敏感性无明显变化。SKOV3细胞置于模拟CO2气腹环境后,与未经CO2处理组比细胞较,Survivin、PCNA、CD44v6mRNA和蛋白的表达明显升高(P<0.01)。加顺铂各组与不加顺铂各组细胞比较各指标表达均明显降低(P<0.01)。CO2+顺铂组与对照组比较各指标表达无明显差异(P>0.05),表明在本实验中顺铂抵消了CO2的不良作用。结论:CO2气腹环境可促进SKOV3细胞Survivin、PCNA、CD44v6 mRNA和蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡,促进肿瘤生长和转移。但CO2气腹环境作用后SKOV3细胞对化疗药物顺铂的敏感性无明显变化,顺铂化疗对其仍然有效,可抵消CO2的不良作用。
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