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目的：采用不同的方法分离培养卵巢癌组织及其细胞系A2780中的卵巢癌干细胞,并通过不同的方法对其进行鉴定,确定其为卵巢癌干细胞,并对其表面抗原进行鉴定,为下一步肿瘤多肽疫苗的研究奠定基础。方法：(1)卵巢癌干细胞的分离、培养：常规消化肿瘤组织,红细胞裂解液裂解红细胞,采用磁珠分选仪分选CD133+卵巢癌干细胞,而后采用无血清干细胞培养液培养卵巢癌干细胞。卵巢癌患者腹水来源肿瘤干细胞分离培养,采用全腹水离心红细胞裂解液裂解红细胞,然后采用干细胞培养液培养卵巢癌干细胞。卵巢癌细胞系来源卵巢癌干细胞的培养,采用干细胞培养基诱导培养。(2)卵巢癌干细胞的鉴定：利用步骤1得到的卵巢癌干细胞进行CD133流式细胞检测和免疫荧光染色鉴定肿瘤干细胞,并通过克隆集落形成实验、传代时间和次数、基质胶分化实验了解卵巢癌自我更新和多向分化能力；体内成瘤实验分别以100及1000个细胞数植入3-4周龄NOD/SCID鼠右腋下,观察肿瘤形成差异。(3)卵巢癌干细胞表面抗原的鉴定：利用定量PCR的方法鉴定卵巢癌和我们所得到的卵巢癌干细胞表面抗原的差异。很多抗原及基因都可能在卵巢癌干细胞中表达,选择更有代表性更有意义的抗原进行鉴定,为下一步抗原表位疫苗的设计的研究打下基础,为临床靶向治疗卵巢癌提供靶分子。结果：(1)组织和细胞株种来源的卵巢癌细胞用干细胞培养液培养。观察细胞大约在3-5天成球并且成悬浮状成长,接种与六孔板中培养,会再次形成50-100个细胞的细胞球,观察细胞成球和克隆集落形成的情况符合干细胞的特征；(2)通过磁性分选得到的CD133+细胞群的CD133表达率达到了82.54%,利用A2780干细胞培养基诱导培养成球后,经过流式细胞仪鉴定CD133表达率约为92.69%；通过免疫荧光、PCR、分化实验、成瘤实验等进一步证明了我们所得到的细胞为卵巢癌细胞；(3)鉴定卵巢癌细胞与卵巢癌干细胞中Sp17、OY-TES-1、LAGE、AKAP3、DPPA2等抗原的表达情况显示,以上抗原在干细胞中的表达均比卵巢癌中的抗原表达高。结论：成功分离了体外培养的卵巢癌细胞中的卵巢癌干细胞、采用了干细胞培养基培养卵巢癌干细胞,并采用了不同的方法从不同方面鉴定了卵巢癌干细胞。进一步对卵巢癌与卵巢癌干细胞的表面抗原表达进行了对比分析,为下一步多肽疫苗的研究打下基础。