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第一部分：宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织中肽基脯氨酰同分异构酶Pin1的表达及与相关因子关系的研究分题一：宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中肽基脯氨酰同分异构酶Pin1的表达目的：探讨肽基脯氨酰同分异构酶(peptidy-prolyl cis／trans isomerase PPIase，简称Pin1)在宫颈癌及各级宫颈上皮内瘤变组织中的表达。方法：运用RT-PCR和免疫组化法分别检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)、Ⅱ级(CINⅡ)、Ⅰ级(CINⅠ)和正常宫颈组织中Pin1 mRNA和蛋白的表达。结果：1．宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ和正常宫颈组织Pin1／actin mRNA的平均光密度比值分别为1.92±0.48，n=10；1.03±0.40，n=10；0.42±0.26，n=10；0.39±0.16，n=10；0.33±0.19，n=10。宫颈癌组的Pin1／actin比值明显高于其他各组，P＜0.01；CINⅢ组高于CINⅡ、CINⅠ和正常组，P＜0.05；CINⅡ、CINⅠ和正常组之间相比差异无统计学意义。2．宫颈癌组Pin1免疫组化染色密度比值为175.50±15.44，n=41；CINⅢ组和CINⅡ组的Pin1染色密度比值分别为155.02±15.84，n=30；153.75±21.20，n=30，两组之间差异无显著性，CINⅡ+CINⅢ总密度比值为154.39±18.56；CINⅠ组Pin1染色密度比值为138.89±11.46 n=30，；正常宫颈组织Pin1密度比值为125.17±15.24，n=10。宫颈癌、CINⅡ+CINⅢ和CINⅠ之间差异有显著性，P＜0.001。CINⅠ与正常宫颈组织之间差异无显著性，P=0.05。结论：Pin1在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中明显高表达，其表达水平与病变程度有关。分题二、宫颈癌组织中Pin1、Cyclin D1的表达及关系目的：探讨宫颈癌组织中Pin1和Cyclin D1的表达及其相互关系。方法：应用RT-PCR和免疫组化法分别检测宫颈癌组织中Pin1和Cyclin D1的mRNA和蛋白质的表达。结果：1．宫颈癌组织中Pin1染色密度平均值为165.97±14.42，n=41，明显高于正常宫颈组织的染色密度(137.09±13.96，n=10)，P＜0.01。其中，Ⅱ期宫颈癌的染色密度值(170.96±13.60，n=30)明显高于Ⅰ期(163.05±13.81，n=11)，P＜0.05；有淋巴结转移组其值(173.59±12.47n=7，)高于无淋巴结转移组(164.40±14.67，n=34)，P＜0.05。不同组织类型和不同分化级别之间Pin1染色密度无差别。2．宫颈癌和正常宫颈组织中Cyclin D1染色密度比值分别为126.72±12.96，n=41；124.23±13.04，n=10，差异无显著性。腺癌组Cyclin D1染色密度值为131.28±12.47，n=11，明显高于鳞癌组的125.04±12.93，n=30，P＜0.05；其余各组之间差异无显著性。3．15例宫颈癌组织中，有10例Pin1mRNA阳性，5例Cyclin D1mRNA阳性。在Pin1阳性病例中有3例Cyclin D1阳性，Pin1阴性病例中由2例Cyclin D1阳性。Pin1和Cyclin D1表达之间无明显相关性，P值为0.699。结论：宫颈癌中组织Pin1表达明显增高，表达水平与期别和是否有淋巴结转移有关，与组织类型和分化级别无关。Cyclin D1的表达与正常组织无差异。宫颈癌中Pin1和Cyclin D1的表达无明显相关性。分题三：宫颈上皮内瘤变组织中Pin1、p16INK4a、Ki—67的表达及关系目的：了解宫颈上皮内瘤变组织中Pin1、p16INK4a、Ki-67、HPV-DNA的表达及关系。方法：用免疫组化法分别检测宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ，n=30)、Ⅱ级(CINⅡ，n=30)、Ⅰ级(CINⅠ，n=30)和正常宫颈组织中(n=10)Pin1、p16INK4a、Ki-67蛋白的表达。结果：1．CINⅢ组和CINⅡ组的Pin1染色密度比值分别为155.02±15.84；153.75±21.20，两组之间差异无显著性，CINⅡ+CINⅢ总密度比值为154.39±18.56；CINⅠ组Pin1染色密度比值为138.89±11.46；正常宫颈组Pin1染色密度比值为125.17±15.24；CINⅡ+CINⅢ组与CINⅠ组和正常对照组之间差异有显著性，P＜0.05。2．p16INK4a的表达在CIN组和正常对照组间及CIN组内的表达差异均有显著性，P值分别为0.018和0.025。Ki-67和HPV-DNA的表达在正常宫颈组织和CIN组之间有差异，P值分别为0.028、0.011，而CIN各组之间无差异。3．p16INK4a阳性和阴性组其Pin1染色比值分别为151.20±19.56、135.52±12.38，P＜0.001：Ki-67阳性和阴性组Pin1值分别为151.90±19.43、138.51±15.59，P＜0.001；HPV-DNA阳性和阴性Pin1值分别为150.05±19.68、140.80±16.75，P=0.20。结论：在宫颈上皮内瘤变组织中，Pin1表达呈不同程度升高，其表达水平与p16INK4a水平一致，也与Ki-67的表达相关。第二部分：宫颈液基细胞涂片中Pin1的表达及意义目的：了解Pin1在宫颈液基细胞涂片中的表达，探讨Pin1作为分子标记物诊断宫颈上皮内病变的价值。方法：选择271例(HSIL67例、LSIL79例、ASC-US57例、ASC-H35例、AGC33例)液基细胞学存档涂片退色后进行Pin1免疫组化染色，比较各组Pin1阳性细胞数。结果以Pin1阳性细胞比值(阳性细胞数／1000细胞)表示。结果：1．HSIL、LSIL、ASC-US、ASC-H和AGC组Pin1免疫组化阳性细胞比值的中位数和四分位间距分别为3.1，4.7；1.4，1.7；1.0，0.95；1.4，1.0；1.6，1.3。HSIL组Pin1阳性细胞中位数明显高于其他各组，P＜0.01。而LSIL、ASC-US、ASC-H和AGC四组之间差异无显著性。2．慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC各组Pin1阳性细胞比值的中位数和四分位间距分别为1.35，1.2；1.2，1.78；4.2，2.3；8.6，3.9；8.5，3.9。CINⅢ和SCC的Pin1阳性细胞中位数明显高于其他各组，P＜0.01。3．分别以CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ为分界点作出ROC，其诊断准确性分别为0.765、0.934、0.978，95％敏感度时对应的Pin1阳性细胞比值为0.59、1.65、3.98。结论：Pin1染色阳性细胞对CINⅡ及以上病变有较好的诊断价值，可作为液基细胞学诊断的辅助方法。第三部分：Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增殖抑制作用目的：了解Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增殖和细胞周期的影响。方法：用MTT法检测不同浓度的Juglone和CTX对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞的增值抑制作用。用流式细胞仪测定细胞周期，观察细胞的形态，并描绘细胞生长曲线。结果：1．Juglone和CTX对HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞增殖均有抑制作用，Juglone作用更明显，P＜0.01。24h后作用达高峰，并呈明显剂量依赖性。2．Juglone和CTX作用于HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞株后，细胞均出现不同程度凋亡，以Juglolqe作用更明显。3．Hela细胞经Juglone作用后以G2／M为主。结论：Juglone对宫颈癌细胞株的增殖有明显抑制作用，并使细胞在G2／M期蓄积。全文小结一、Pin1在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中高表达，其表达水平与病变程度有关。二、宫颈癌中组织Pin1表达增高，其表达水平与期别和是否有淋巴结转移有关，与组织类型和分化级别无关。Cyclin D1的表达与正常组织无差异。宫颈癌中Pin1和Cyclin D1的表达无明显相关性。三、在宫颈上皮内瘤变组织中，Pin1表达呈不同程度升高，其表达水平与P16INK4a水平一致，也与Ki-67的表达相关。四、Pin1染色阳性细胞对CINⅡ及以上病变有较好的诊断价值，可作为宫颈癌筛查的辅助方法。五、Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增值有明显抑制作用，并使细胞G2／M期蓄积。