【摘 要】
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目的:使用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术（ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry,UHPLC-Q-TOF/MS）对复方守宫散（Compound Shougong Powder,CSP）入血成分进行定性分析,为进一步研究CSP治疗肺癌的作用机制提供参考
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目的:使用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术（ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry,UHPLC-Q-TOF/MS）对复方守宫散（Compound Shougong Powder,CSP）入血成分进行定性分析,为进一步研究CSP治疗肺癌的作用机制提供参考。通过网络药理学方法筛选方中不能由质谱技术测定入血成分的守宫的化学成分,利用网络药理学数据平台在入血成分和守宫化学成分基础上预测CSP可能的作用靶点,并进一步构建CSP成分-肺癌靶点-信号通路网络,以研究分析CSP治疗肺癌的作用机制,为下一步动物实验的设计提供理论依据和方向性指导。方法:使用沃特世超高效液相色谱仪（ACQUITY UPLC）与沃特世高分辨质谱仪（Waters Synapt G2-Si QTOF）测取CSP含药血浆、空白血浆、混合对照品溶液及原药样品溶液的液相色谱-质谱图,再将从图中获取的质谱信息与UNIFI（沃特世科学信息平台）质谱数据库（包含自建数据库）中的化学物质信息进行比对,鉴定出CSP的入血成分;通过搜索中药系统药理学技术平台（TCMSP）、Pubchem等数据库和查阅文献的方式检索守宫的化学成分。并利用Swiss Target Prediction平台预测CSP入血成分和守宫化学成分的潜在靶点,通过人类基因数据库（Genecard）和人类孟德尔遗传数据库（OMIM）检索肺癌相关的疾病靶点。然后利用Metascape数据库对CSP成分和肺癌的交集靶点进行KEGG通路富集分析及GO生物过程（GOBP,GO biological process）富集分析,以获取相关信号通路和生物过程。最后将获取的CSP全部成分、靶点和信号通路信息构建成Excel映射关系表格,输入Cytoscape3.9.0处理软件,搭建成CSP成分-作用靶点-信号通路网络关系。结果:（1）CSP入血成分和守宫化学成分:利用UHPLC-Q-TOF/MS技术鉴定出绿原酸、（-）-表儿茶素、异鼠李素等CSP在大鼠血浆中移行成分27个。在网络药理学相关数据库中未搜集到守宫相关成分信息,通过查阅相关文献共获取腺嘌呤、腺苷、谷氨酸等守宫化学成分23个。（2）CSP作用靶点和肺癌疾病靶点:通过TCMSP、Pubchem和Swiss Target Prediction数据平台预测CSP入血成分和守宫化学成分的潜在靶点,取并集后共得到EGFR、MPO、PIK3CA等入血成分相关作用靶点399个,CCND1、EGFR、ESR1等守宫成分相关作用靶点267个。通过人类基因数据库和人类孟德尔遗传数据库检索到RB1、TERT、TP53等肺癌相关的疾病靶点514个。将药物靶点与疾病靶点输入Venny 2.1.0平台分别获得AKT1、CCND1、CASP8等入血成分-肺癌交集靶点18个以及ALDH2、MARS等守宫成分-肺癌交集靶点6个。（3）KEGG通路富集分析:将CSP成分-肺癌交集靶点输入Metascape平台,结果共富集得到PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等CSP入血成分相关的信号通路81条,癌症中的蛋白多糖通路等守宫化学成分相关的信号通路5条。（4）GO功能富集分析:将CSP成分-肺癌交集靶点输入Metascape平台,结果共富集得到调节凋亡信号通路（regulation of apoptotic signaling pathway）、调节有丝分裂细胞周期的G1/S转变（regulation of G1/S transition of mitotic cell cycle）等入血成分参与的GO生物过程92个,对雌二醇的反应（response to estradiol）等守宫化学成分参与的生物过程5个。结论:基于CSP入血成分,并利用网络药理学技术得出相关结果,依据研究结果,可以推测CSP可能通过槲皮素、大黄素、异鼠李素、大黄素甲醚等核心成分,作用于ESR1、EGFR、AKT1、TERT、TP53等关键靶点,发挥调节凋亡信号通路、调节有丝分裂细胞周期的G1/S转变、调节蛋白激酶活性等生物学作用,最终通过调控PI3K-Akt信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路、PD-1/PD-L1信号通路等信号通路发挥治疗肺癌的作用。
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