论文部分内容阅读
马拉硫磷作为一种有机磷杀虫剂因高效、广谱、低毒等特点被广泛应用于农业生产,同时对环境及人类健康造成了负面影响。研究发现,长期暴露于马拉硫磷、敌敌畏、氧化乐果等有机磷农药会对不同实验动物产生不同程度的生殖损伤。本研究旨在探讨马拉硫磷对雄性大鼠产生的生殖毒性,观察雄性大鼠暴露于马拉硫磷后在精子动力学、睾丸组织学、睾丸标志酶活力、性激素水平、睾丸细胞凋亡及相关蛋白表达水平的毒性改变。[研究目的]探讨马拉硫磷对雄性大鼠生殖系统的毒性作用,为系统探讨马拉硫磷的毒性作用及其毒作用机制等研究提供依据与线索。[研究方法]选择SPF级Wistar雄性大鼠40只,体重80-100g,适应环境1周后,将大鼠随机分为4组,设马拉硫磷低、中、高剂量组和对照组,每组10只。实验组给予马拉硫磷溶液经口灌胃染毒,染毒剂量分别为33.75mg/kg(1/32LD50)、54mg/kg(1/20LD50)、 108mg/kg(1/10LD50)体重。大鼠灌胃量为1ml/100g体重；对照组给予等量的蒸馏水,每天一次,连续60天。每天观察大鼠摄食、饮水、黏膜、行为活动、毛色、尿液、粪便等有无异常。于末次染毒结束24h后,颈椎脱臼处死大鼠,立即取睾丸和附睾,观察其形态、迅速剥离脂肪组织,称取双侧睾丸和附睾重量。取左侧附睾尾,制备精子悬液用于测定大鼠精子数量、活率及畸形率。制备睾丸组织匀浆用于检测睾丸组织标志酶ACP、LDH, SDH、γ-GT活力。采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测睾丸组织细胞凋亡、免疫组化SABC法测定Bax和Bcl-2蛋白表达水平,睾丸组织病理学检查采用HE染色法进行测定。采用摘眼球取血法取血,测定乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,酶联免疫吸附(ELISA)法测定间质细胞刺激素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)和睾酮①等性激素水平。[研究结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠体重、睾丸和附睾重量明显降低(p<0.01)；高剂量组染毒组大鼠精子计数明显减少(p<0.01),中、高剂量染毒组大鼠精子活率明显降低、精子畸形率明显升高(p<0.01)。与对照组相比,各染毒剂量组大鼠睾丸标志酶ACP、γ-GT活力降低,LDH活力升高,且高剂量染毒组较对照组差异有统计学意义(p<0.01)。与对照组相比,各剂量染毒组大鼠血清性激素水平降低,差异有统计学意义(p<0.05；p<0.01)。乙酰胆碱酯酶活性随染毒剂量的升高而降低,且高剂量染毒组较对照组差异有统计学意义(p<0.05)。睾丸组织病理学检查发现,中、高剂量染毒组大鼠部分生精小管及生精细胞排列疏松并萎缩,精原细胞、支持细胞数量减少,生精细胞脱落,间质水肿。与对照组相比,三个染毒组大鼠生精细胞凋亡数量增加,凋亡率升高,差异有统计学意义(p<0.01)。Bax蛋白阳性颗粒数量随染毒剂量的升高而增加,中、高剂量染毒组Bax灰度值低于对照组(p<0.01)；Bcl-2蛋白颗粒明显减少,与对照组相比,中、高剂量染毒组Bcl-2灰度值升高,差异有统计学意义(p<0.05)。[研究结论]1.马拉硫磷使雄性大鼠体重、睾丸和附睾重量降低,精子数量减少、精子活率降低、精子畸形率升高,影响大鼠正常生精过程。2.马拉硫磷降低雄性大鼠乙酰胆碱酯酶活性,降低睾丸标志酶ACP、γ-(GT活力,使LDH活力升高,抑制大鼠精子发生。3马拉硫磷降低雄性大鼠血清中性激素LH、FSH、T水平,干扰大鼠内分泌系统正常生理功能。4.马拉硫磷造成雄性大鼠睾丸组织病理损伤,且损伤程度随染毒剂量的升高而加重,导致雄性大鼠生精障碍。5.马拉硫磷导致雄性大鼠睾丸组织生精细胞凋亡,同时改变凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。6.马拉硫磷对雄性大鼠产生了生殖毒性。