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血友病A ( Hemophilia A,HA )是最常见的遗传性出血性疾病,发病率为1/5000-1/10000,遗传特点是男性发病,女性携带。血友病A的病因是由于凝血因子VIII(Factor VIII,FVIII)基因缺陷引起FVIII含量不足或功能缺陷,导致凝血障碍。临床表现为全身各部位的出血,以皮肤、粘膜及关节肌肉多见,严重的关节、肌肉反复出血常导致畸形,重要脏器出血可危及生命。由于目前尚无有效的根治措施,所以携带者检测及早期产前诊断切断遗传途径、降低血友病发病率是最行之有效的方法。因子VIII(Factor VIII, FVIII)基因位于X染色体长臂末端(Xq28),长186kb,有26个外显子和25个内含子。直接检测基因突变的方法是最理想、最准确和最可靠的诊断方法,然而FVIII基因突变具有明显的异质性,目前已有500余种报道,使得直接法在血友病A的诊断中变得困难,因此作为间接法的DNA多态性标志物连锁分析是目前广泛采用的方法。间接诊断的方法必须有先证者的DNA,且患者的母亲必须是该分析位点的杂合子。目前已有许多FVIII基因内或旁的多态性标志物被报道,如内含子18的Bcl I、内含子22的Xha I、内含子19的Hind III限制性片断多态性(Restrict Fragment Length Polymorphism, RFLP),内含子13和22的CA双核苷酸短重复序列(Simple Tandem Repeats ,STR)以及外源性的定位在距FVIII基因2cM处的ST14(DXS52)可变数目串联重复序列(Variable Number Tandem Repeats, VNTR)等。这些标志物已被广泛应用于血友病A携带者的基因检测与产前诊断。不同地区、不同民族中各多态性标志物的杂合率有所不同,本研究采用对中国人提供信息量较多的Bcl I、ST14(DXS52)两个位点对血友病A家系进行基因分析。研究对象选自2004年10月～2005年11月山西医科大学第二医院及山西省儿童医院门诊及住院的8个血友病A患者及其家系成员42人,家系中17例女性需做携带者诊断,其中1例无家族史,为散发家系。所有家系中的先证者按血友病A诊断标准确诊。采用比浊法测定活化部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time, APTT)、凝血酶原时间(Prothrmbin Time, PT)、凝血酶时间(Thrombin Time, TT);血浆凝固法(一期法)检测FVIII活性(FVIII:C)、FIX活性(FIX:C);常规酚-氯仿法提取DNA;ST14位点采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)进行产物分析,Bcl I位点采用聚合酶链反应-限制性片断多态性(Polymerase Chain Reaction-Restrict Fragment Length Polymorphism, PCR-RFLP)方法进行分析。Bcl I是位于FVIII基因内含子18中的RFLP位点,运用Bcl I位点对8个血友病A家系进行检测,结果显示:17例女性中4例为142/99bp杂合子,其余均为99/99bp纯合子,杂合率为23.53%(4/17)。25例男性中,仅1例为142bp/Y,其余均为99bp/Y。其中3个血友病A家系中先证者的母亲为142/99bp杂合子,用Bcl I位点可以提供诊断信息,并为5例血友病A家系女性成员作出携带者诊断,信息率为37.5%(3/8)。另5个血友病