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猪圆环病毒属于环状病毒科,圆环病毒属,其成员包括PCV1和PCV2。PCV1对猪没有致病性,而PCV2可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)。在国产猪中PCV2的感染非常普遍,而且在五大洲各个国家都诊断出有PMWS发生,患病率在4-30%不等。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是单链RNA病毒,属于尼多病毒目、冠状病毒科,能够引起猪的传染性胃肠炎。各个品种和各个年龄段的猪都对TGEV易感,并且在感染后3周内死亡率可达到100%。因此,PCV2和TGEV在世界范围内的养猪业中都是毁灭性疾病,预防接种是避免PCV2和TGEV感染的有效方法。虽然现有的抗PCV2和TGEV的疫苗可以有效地减少临床症状的出现,并且能够提高农场生产量,但这些疫苗无法完全防止PCV2和猪TGEV的感染和传播。此外,一些实验性的灭活疫苗、DNA疫苗、含有PCV2Cap或TGEV S基因的重组活病毒载体疫苗也用于抗PCV2和TGEV的感染。尽管如此,这是首次在同一种疫苗载体中共表达PCV2Cap和TGEV S基因,并用其免疫猪以抵抗PCV2和TGEV的感染。本研究的目的是在真核表达载体中共表达PCV2Cap和TGEV S融合蛋白基因,并评价该重组DNA疫苗在猪体内抵抗PCV2或TGEV感染的免疫原性和保护率。因此,我们在pEGFP-N1真核表达载体中个使PCV2Cap基因(702bp)和包括免疫位点A的TGEV S基因(1830bp)得到共表达。Cap基因和S基因之间采用柔性接头(Gly4Ser)3相连。重组疫苗已经通过PCR、双酶切和测序进行鉴定。利用Western blot检测PCV2Cap、TEGV S和Cap-S重组蛋白在PK-15细胞中的表达。利用间接ELISA检测IFN-γ的体外表达水平。将32只猪随机分成6组,每次每只免疫500μg pEGFP-Cap、pEGFP-S、pEGFP-Cap-S和2ml PBS,每隔两周免疫一次,共免三次。在第三次免疫后一周攻毒,攻毒剂量为2x107TCID50的PCV2或TGEV病毒。通过间接ELISA、NA、T淋巴细胞流式细胞术、病毒量、HE和免疫組化等试验检测这种DNA疫苗在猪体内针对PCV2和TGEV的免疫原性和保护效率。本研究结果显示,用pEGFP-Cap或pEGFP-S免疫的实验组,可以通过诱导高度特异性血清IgG抗体、IgA、IgG1和IgG2a同型抗原以及细胞因子(IFN-γ和IL-10)而引发猪体内的固有保护机制。这些DNA疫苗能够减少PCV2和TGEV的病毒量。Cap和S基因共表达的产物能够加强免疫动物针对PCV2或TGEV感染的体液和细胞免疫应答。HE染色显示pEGFP-Cap、pEGFP-S和pEGFP-Cap-S免疫组没有明显的组织病理学损伤;免疫组化结果显示,与PCV2和TGEV攻毒对照组相比,也仅有少量的阳性细胞。总之,本研究证明:PCV2Cap和TGEV S基因共表达的重组DNA疫苗能够大大减轻PCV2和TGEV对猪的感染。