原发性眼眶MALT淋巴瘤患者VCP表达与患者预后的相关性及机制的研究

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目的:探讨含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein, VCP)表达水平与原发性眼眶MALT淋巴瘤患者预后的相关性,及VCP对人淋巴瘤细胞凋亡及增殖能力的影响。方法:1.58例原发性眼眶MALT淋巴瘤患者眶内淋巴瘤组织石蜡标本,采用免疫组化法检测VCP表达水平,并对VCP表达水平与患者复发情况及生存率的相关性进行统计学分析,用X2检验及Fisher精确检验来分析VCP蛋白表达与各临床因素之间的关系;Kaplan-Meier法计算复发率、生存率,并绘制生存曲线;log-rank法计算组间差异,P<0.05为差异具有统计学意义;2.根据免疫组化结果即VCP蛋白表达水平,选取10例患者眶内肿瘤石蜡组织(5例×2组)抽提总RNA,并应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)定量比较2组VCP基因表达水平的差异;3.免疫细胞化学染色法检测人淋巴瘤细胞系Raji细胞及Daudi细胞VCP蛋白的表达。应用特异、高效并操作方便的RNAi技术,以VCP作为基因靶点,对Raji细胞建立有效的RNA干扰方法。利用脂质体介导基因si-VCP转染Raji细胞,RT-qPCR及Western blot分别从1nRNA水平及蛋白水平评估Raji细胞VCP基因沉默效果;4.流式细胞术检测VCP基因沉默的人淋巴瘤Raji细胞凋亡率的变化;5.MTS法检测VCP基因沉默对Raji细胞增殖能力的影响。结果:1.58例眼眶MALT淋巴瘤患者中13例(22.4%)患者出现肿瘤复发。复发时间为10-56个月,其平均值为39.5个月。8例患者(13.8%)死于肿瘤,4例患者(6.9%)死于与肿瘤无关的其他原因。5年无瘤生存率及总生存率分别是70.7%、79.3%。5年无瘤生存时间为10-60个月,其平均值为54.7个月;5年总生存时间为24-60个月,其平均值为57.2个月。2.58例原发性眼眶MALT淋巴瘤患者眶内肿瘤组织VCP表达阳性细胞百分率为32%到95%。VCP表达阳性细胞百分率的中位值为45%,低于或等于45%为VCP表达level1,高于45%为VCP表达level2。58例原发性眼眶MALT淋巴瘤患者眶内肿瘤组织VCP表达水平与患者复发(P=0.003)及肿瘤大小(P=0.008)密切相关。VCP表达水平与患者年龄、性别、LDH水平、红细胞沉降率(ESR)、血清白蛋白水平、有无B症状等临床特征无明显相关性(P>0.05)。同时,VCP表达level1患者5年无瘤生存率及总生存率明显高于level2患者(P=0.001;P=0.032)。3.10例患者眶内肿瘤组织VCPmRNA表达水平与VCP蛋白表达水平一致,根据免疫组化结果level2组患者肿瘤组织VCPmRNA表达明显高于level1组(P=0.009)。4.人淋巴瘤细胞系Raji细胞及Daudi细胞VCP蛋白表达较强。利用脂质体进行细胞转染,VCPmRNA水平和蛋白表达水平分别被抑制65%和57%,基因沉默效果肯定。5.流式细胞术结果显示,人淋巴瘤细胞系Raji细胞VCP基因沉默后,细胞凋亡明显增强。6.MTS结果显示,人淋巴瘤细胞系Raji细胞VCP基因沉默后,细胞增殖能力明显受到抑制。结论:1.VCP是评价原发性眼眶MALT淋巴瘤患者预后的良好指标。2.利用脂质体介导si-VCP对人淋巴瘤Raji细胞靶基因VCP的抑制效果明显,VCPmRNA表达水平明显降低,从而使VCP蛋白表达量明显下降。3.VCP基因沉默可明显促进体外培养人淋巴瘤细胞的凋亡,并降低细胞增殖能力。VCP在人淋巴瘤细胞凋亡及增殖过程中起重要作用,可能是原发性眼眶MALT淋巴瘤治疗的新的分子靶点。
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