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本文建立一种培养兔RPECs的简便有效的方法。并验证荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记兔视网膜色素上皮细胞(RPECs)的可行性,创建一种简便可靠的应用于RPECs的荧光标记方法。
研究采用眼杯片胰酶一次消化法分离并培养兔RPECs,摸索并调整分离培养的方法和条件,培养成单层细胞后传代。免疫细胞化学鉴定细胞纯度。研究将传代后纯化的兔RPECs悬浮于不同浓度的CFDA-SE染色液中孵育不同时间,根据染色细胞的荧光强度,活性和贴壁率确定CFDA-SE标记兔RPECs的理想条件。将染色细胞继续贴壁培养,通过流式细胞分析及荧光显微镜观察了解荧光衰减时间,以确定该染色剂能够被追踪的时间。并将染色初始和4w后细胞表达的部分抗原进行对比,探究CFDA-SE对细胞的潜在影响。最后混合培养染色后兔RPECs及非染色的人RPECs,检测是否有染料渗漏。
结论为,眼杯片胰酶一次消化法是理想的分离培养兔RPECs的方法。(2)活体染料CFDA-SE是一种染色率高,追踪时间长,应用简便安全可靠的标记兔RPECs的新方法。