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目的:探讨在Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependentkinase5,CDK5)的激动亚基p35/p25的影响。
方法:选用孕期的清洁级SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠,分离纯化胎鼠海马神经元,选择适宜浓度的凝聚态Aβ25-35,作用于海马神经元不同时间,选择tau蛋白磷酸化水平最高的时间点,通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠海马神经元CDK5的两个亚基cdk5和p35/p25的蛋白水平,以及CDK5的磷酸化底物tau蛋白在Thr205、Ser396和Sr404位点的磷酸化水平。
结果:凝聚态Aβ25-35(20μmol/L)作用于海马神经元12h,可使海马神经元中p25的蛋白水平和p25/p35的比值增高,以及tau蛋白在Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,但对cdk5亚基表达水平影响并不明显。Rb1和calpain特异性抑制剂calpeptin可减少海马神经元p25的生成,同时人参皂苷Rb1和CDK5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白的过度磷酸化水平。
结论:p25/cdk5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。