目的以兔骨髓充间质干细胞为基础,利用人脱细胞羊膜、猪小肠粘膜下层为支架材料体外构建组织工程骨膜。观察兔骨髓充间质干细胞在两者上的生长、分化情况以及体外测定两种组织工程骨膜的成骨活性。我们可以为寻找能够构建理想组织工程骨膜的支架材料提供相应的实验数据支持。方法实验可分为三组来进行,人脱细胞羊膜搭载兔骨髓间充质干细胞,记为HAAM组;猪小肠粘膜下层搭载兔骨髓间充质干细胞,记为SIS组;不搭载支架材料的兔骨髓间充质干细胞,记为空白对照组。家兔的长干骨当中提取出骨髓间充质干细胞是实验的第一步,经过成骨诱导培养,进行组织学观察并绘制生长曲线。其次,分别将人羊膜,猪小肠粘膜下层进行脱细胞及消毒灭菌,进行大体形态学观察并在电镜下观察两者组织形态,并以两者负载第三代兔骨髓间充质干细胞,从而体外构建出组织工程骨膜。然后电镜下观察两者组织形态以及MTT法检测兔骨髓间充质干细胞在人脱细胞羊膜和猪小肠黏膜下层的增殖情况。最终体外测定两者碱性磷酸酶、骨钙素分泌量。结果1.经过在体外成骨诱导培养后,兔骨髓间充质干细胞可以存活并增殖传代,并且具有成骨细胞的特征。2.经过消毒灭菌处理的的人脱细胞羊膜、猪小肠粘膜下层,两者表面均无残留的细胞,其空间结构基本保持完整,可见清晰的纤维组织。3.在人脱细胞羊膜较猪小肠粘膜下层和空白组的细胞增殖量更多,且分泌的碱性磷酸和骨钙素也比其余两组多。结论1.家兔骨髓间充质干细胞经过体外成骨诱导后,与成骨细胞形态相似、作用相同。2.搭载在支架材料上的细胞增殖量更多。3.人羊膜与猪小肠粘膜经过处理后,不携带细胞,仅存胶原纤维,无细胞毒性,具有适宜骨髓间充干细胞生长、分化的空间结构。4.人脱细胞羊膜具体网状的纤维结构较猪小肠粘膜下层的平行纤维结构更适合家兔骨髓间充质干细胞增殖及表达成骨细胞表型,分泌较多的碱性磷酸酶和骨钙素。更适合用作支架材料来构建组织工程骨膜。