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脂质体作为一种药物递送系统具有生物相容性好、可降解和无毒性的特点,对单核巨噬细胞有着天然的靶向性。肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)是肿瘤微环境中的重要组成部分,来自于血液单核巨噬细胞,可通过多种机制促进肿瘤的发展与转移。甲氨喋呤(methotrexate, MTX)作为一种常用抗癌药物,有研究显示其对单核巨噬细胞具有特异性毒性。本文将MTX包载入脂质体中,制备了载MTX的传统脂质体和聚乙二醇(Polyethylene Glycol, PEG)修饰长循环脂质体,考察前者在体外对巨噬细胞的毒性作用,并初步考察了二者的体内药动学差异,为进一步研究其在TAMs含量高的小鼠3-甲基胆(3-methylcholanthrene,3-MCA)骨肉瘤和TAMs含量低的小鼠CT26结肠癌模型的抗瘤活性提供基础,从而最终确定MTX脂质体能否通过作用于TAMs而发挥抗肿瘤活性,反过来也能进一步验证TAMs能否适于作为抗肿瘤的重要辅助靶点。具体研究内容及结果如下：1)MTX传统脂质体的制备及表征采用薄膜分散法制备出了MTX传统脂质体,通过浊度和MTX吸附率的测定,确定了MTX脂质体纯化的工艺条件；通过动态光散射法(DLS)及扫描电子显微镜(SEM)对MTX脂质体的粒径及形态进行表征,并测定了脂质体的包封率和药脂比。实验结果显示,G-50微柱对传统脂质体的回收率和游离MTX的吸附率都达到了90%以上,适合分离脂质体与游离MTX；传统脂质体的粒径分布主峰约在11.tm,脂质体呈圆形,包封率约4%。2)MTX脂质体对巨噬细胞的毒性效应研究利用L929上清和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor, M-CSF)成功诱导出骨髓来源的巨噬细胞(Bone Marrow-Derived Macrophage, BMDM);利用酸性磷酸酶法对培养出的BMDM进行鉴定；使用高内涵显微镜测定细胞对脂质体的吞噬,利用MTS对细胞毒性进行测定。结果表明,M-CSF诱导的BMDM比L929上清诱导的BMDM细胞形态更均一,细胞活性更高,细胞纯度达到90%以上；BMDM和RAW 264.7对脂质体都能高效摄取,且呈明显的时间和剂量依赖性,BMDM的摄取能力明显高于RAW 264.7; MTX脂质体对BMDM和RAW264.7细胞都存在明显的毒性作用,且显著高于同剂量的游离MTX。3)传统脂质体和PEG修饰的长循环脂质体的初步药动学研究制备了传统空白脂质体和PEG修饰的长循环空白脂质体并用DiR进行标记。尾静脉分别注入CT 26结肠癌移植瘤模型和3-甲基胆葸诱发瘤模型小鼠体内后,利用活体成像仪观察了两种脂质体的生物分布情况。研究结果表明,CT 26细胞和3-甲基胆蒽均能成功诱导小鼠产生肿瘤,成瘤率在90%以上；传统脂质体更容易被肝脾巨噬细胞所吞噬,而PEG修饰的脂质体则更容易通过EPR效应进入肿瘤。4)MTX长循环脂质体的制备和对人骨肉瘤细胞的体外抗瘤活性研究采用薄膜分散法制备传统甲氨蝶呤脂质体(MTX-LIP),后插入法制备甲氨蝶呤长循环脂质体(PEG2000-MTX-LIP),并用超速离心法、G-10微柱离心法和G-50微柱离心法去除未包载的游离药物,对三种方法纯化后脂质体的回收率、粒径、形态、包封率及药脂比等理化性质进行表征；用MTS法研究经超速离心法和G-50微柱法纯化后的PEG2000-MTX-LIP对人骨肉瘤细胞MG-63的毒性。研究结果表明,G-50微柱离心法是最合适的MTX脂质体纯化方法,具有回收完全和快速的优点；制备的MTX长循环脂质体粒径约在200 nm,粒径分布窄,粒径均匀,各种纯化方法对脂质体粒径影响较小；相比游离MTX, MTX脂质体对MG-63具有显著增强的体外抗瘤活性,在人骨肉瘤的化疗上有潜在的应用前景。综上所述,实验中制备的传统MTX脂质体对BMDM和RAW 264.7细胞都具有明显毒性,DiR标记的传统脂质体和PEG修饰的长循环脂质体在体表现出了不同的药动学特性,前者优先被血液循环中单核巨噬细胞吞噬,后者则部分被血液循环中单核细胞吞噬、部分进入肿瘤组织,从而可能表现出不同的抗肿瘤活性。