论文部分内容阅读
目的：检测胃癌组织标本和胃癌细胞株中的长链非编码RNA SNHG16（Long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene16，lncRNA SNHG16）表达，体外探讨其对胃癌细胞HGC-27增殖、迁移、侵袭、凋亡及对5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5-Fu）药物敏感性的影响及相关机制。 方法:（1）实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测SNHG16在60例胃癌组织和对应癌旁组织、4株不同分化程度胃癌细胞株及胃粘膜上皮细胞中的表达，分析SNHG16表达与胃癌临床病理特征相关性。（2）设计3条针对SNHG16的特异性siRNA（small interference double-stranded RNA，siRNA）序列、1条非特异性siRNA阴性序列、一条羧基荧光（FAM）标记的阴性序列。实验分为空白组（control）、阴性对照组（si-NC）、FAM标记阴性组（si-FAM）和干扰组（si-SNHG16）通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染构建SNHG16低表达的胃癌细胞模型。（3）CCK-8法检测敲低SNHG16表达对胃癌细胞HGC-27增殖及5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5-Fu）药物敏感性的影响；流氏细胞术检测细胞周期及凋亡的变化；Hoechst33342染色观察细胞凋亡的形态变化；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。（4）Western blot检测细胞周期依赖性蛋白激酶（cyclin dependent kinase,CDK）蛋白酶之一CDK2、细胞分裂周期蛋白（Cell division cycle42,CD42）和RhoA的相对表达。 结果：（1）SNHG16的可变剪接体1（SNHG16-V1）在胃癌组织中较癌旁组织表达上调（P＜0.05）且与胃癌的侵袭相关（P＜0.05）。（2）与正常的胃黏膜上皮细胞株GES-1相比较，HGC-27、BGC-823、AGS三株细胞株中SNHG16的4个可变剪接体呈现高表达，其中SNHG16-V1、SNHG16-V3、SNHG16-V4在细胞株HGC-27中表达最高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。SGC-27细胞中SNHG16-V2和SNHG16-V3呈现高表达，差异具有统计学意义（P＜0.05），而SNHG16-V1呈低表达，差异具有统计学意义（P＜0.01）。（3）当荧光显微镜观察si-FAM的转染效率高于90%时。RT-qPCR验证干扰SNHG16的最佳干扰效率为si-SNHG16-1（68.49±12.05）%,（P＜0.05）。（4）CCK8结果显示敲低SNHG16表达HGC-27活细胞百分数较阴性对照组（si-NC）降低，联合5-Fu培养72 h时HGC-27活细胞百分数较联合了5-Fu的阴性对照组（si-NC-5-Fu）也降低，说明增加HGC-27对5-Fu敏感性（P＜0.01）。（5）划痕实验和Transwell结果显示敲低SNHG16表达HGC-27的迁移和侵袭能力受到抑制，差异有显著性（P<0.05）。（6） Hoechst33342染色结果显示，敲低SNHG16对HGC-27细胞的凋亡形态没有明显影响。（7）流式细胞术凋亡检测结果显示，敲低SNHG16对HGC-27细胞凋亡率没有影响（P>0.05）。（8）流式细胞术周期分析结果显示，敲低SNHG16 HGC-27细胞S期比例升高12%，G2/M期比例降低8%差异有显著性（P<0.05）。（9）WB结果显示敲低SNHG16表达后，周期相关蛋白CDK2和侵袭相关蛋白CDC42、RhoA蛋白表达较阴性对照组和空白组相对表达量下降，差异有显著性（P<0.05）。 结论：长链非编码 lncRNA SNHG16在胃癌组织中高表达，且与侵袭相关。SNHG16表达能够影响细胞增殖、迁移、侵袭等生物学性状。提示其可能参与胃癌发生发展。