论文部分内容阅读
逆转录病毒需要从宿主细胞中出芽才能继续传播。为了能够出芽，一些病毒通过Gag蛋白与MVB(multivesicular bodies)分子机器之间的相互作用，劫持了通常用于分拣转运泛素化蛋白到溶酶体的MVB通路。这条通路主要由ESCRT(endosomal sorting complex required for transport)复合物构成，这些复合物可以大体分为四个，分别为ESCRT-0，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ。
实验中我们发现TBK1直接与ESCRT-Ⅰ中的VPS37C相互作用。并且他们的相互作用并不会影响MVB的超微结构和MVB通路的正常生理功能。在Vero细胞中，过表达TBK1会使HIV-1假病毒的出芽减少，而用shRNA敲低TBK1的表达能使HIV-1假病毒的出芽效率增加。由于Vero细胞中Ⅰ型干扰素产生缺陷，所以TBK1对于HIV-1假病毒出芽的抑制作用不依赖于其Ⅰ型干扰素产生的功能。而在常用的TZM-B1细胞中，敲低TBK1的表达可以使CXCR4嗜性的NL4-3和CCR5嗜性的JR-CSF HIV-1毒株的出芽相应升高。同时我们采用小鼠白血病病毒MLV和MLV/p6这对病毒在TBK1敲除的小鼠成纤维细胞(MouseEmbryonic Fibroblast，MEF)中重复了以上的实验。MLV/p6病毒是在MLV的基础上用HIV-1的PTAP motif替换了MLV原本的PPPY motif而来的，该病毒的出芽受控于ESCRT-Ⅰ复合体。结果显示，MLV/p6在TBK1敲除的MEF细胞中的出芽效率明显高于野生型细胞，而MLV在这两种细胞中的出芽效率相当，说明TBK1可以特异地抑制PTAP依赖的病毒出芽而对PPPY依赖的病毒出芽没有相应的抑制作用。最后，我们发现VPS37C可以特异地被TBK1磷酸化，并且TBK1的激酶功能对于它的抑制出芽功能是必须的：TBK1的激酶突变体K38A的过表达可以促进HIV-1假病毒在Vero细胞中的出芽。
综上，我们认为TBK1通过与VPS37C的相互作用，调控了ESCRT-Ⅰ的功能，从而抑制了PTAP依赖的病毒出芽。这项工作不仅发现了一种新的不依赖于Ⅰ型干扰素的抗病毒机制，而且为进一步认识TBK1的功能提供了新的线索。