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采用DNA测序方法首次对内蒙古豹蛛属(Pardosa)7种蜘蛛的线粒体12s rRNA基因部分序列进行了测定,并以网上下载的狼蛛科獾蛛属的武昌獾蛛(Trochosa wuchangensis)及自测的大腹园蛛(Araneusventricosus)作为外类群,使用Mega4.0软件分析,并用N-J、MP、ME法构建分子系统树,获得如下结论:
1.用引物12St-L-14503(5-GGTGGCATTTTATTTTATTAGAGC-3)、12Sbi-H-14214(5-AAGAGCGACGGGCGGGCGATGTGT-3)进行PCR扩增和测序,电泳后得到300bp左右的条带。
2.测序所得豹蛛属7种蜘蛛12s rRNA基因序列平均长度为263bp,其平均碱基组成分别为:A:44.2%、T:36.7%、C:9.3%、G:9.6%,A、T含量明显高于G、C含量。
3.对所测序列进行比对分析后,序列中变异位点是45个,简约信息位点是218个,变异率为17.0%,说明12s rRNA基因序列是保守序列,适用于物种的系统发育研究。
4.不同序列问的转换加颠换值最高为21,最低为4,颠换的发生主要以T-A,A-T为主,转换主要以C-T,T-C为主。
5.不同方法构建的系统树基本一致,7个种分为3支:即拉普兰豹蛛组、蒙古豹蛛组、山栖豹蛛组,与尹长民《中国狼蛛》根据形态解剖得出的结论相一致。
6.在蜘蛛目中属间的遗传多样性研究中,12s rRNA基因可以作为良好的分子标记予以应用。
7.采用SDS法提取-20℃冷冻保存蜘蛛标本总DNA是便于操作且效果理想的提取方法。
8.乙醇浸泡标本的DNA在短期内的降解与时间梯度无关。