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番茄是一种世界性的蔬菜，产量高，营养丰富，口感好，可以当作水果食用。但是番茄病害是限制番茄生产的一个很大因素，随着番茄栽培面积的扩展，番茄病虫害的危害越来越严重，对番茄扩大化生产产生了巨大的影响。目前，培育抗多种病害的番茄品种是防治病虫害最有效的方法。利用传统育种方法培育多抗性番茄品种需要的育种时间长，工作量大，而且受环境和地域影响很大。利用分子标记技术，结合传统育种方法培育抗多种病害的番茄种质资源，可以保证目标性状的准确性，而且能减少工作量，缩短育种年限。本试验通过多亲杂交技术，将抗番茄叶霉病、番茄根结线虫病、番茄枯萎病和番茄黄化曲叶病毒病的材料进行杂交，利用分子标记辅助选择和人工接种病原菌鉴定法相结合，培育同时抗多种病害且品质优良的番茄材料，为利用基因聚合技术选育多抗的番茄优良品种奠定基础。本试验主要结果如下：1.利用多亲杂交技术，获得同时含抗番茄叶霉病（Cf-5）、番茄根结线虫病（Mi）、番茄枯萎病（I-2）和番茄黄化曲叶病毒病（Ty-1、Ty-2）5种抗病基因的三交种F1代材料，对该材料进行自交繁殖，得到了三交种F2和F3代番茄植株。2.查找大量相关文献，从中选取番茄相关抗性的特异性引物，经过计算和比较特异性引物的△G值、Tm值和CG含量，以及检验单引物PCR特异性扩增的结果，最终得到了能够应用于多重PCR体系的4对特异性引物。3.本试验利用多重PCR技术，利用筛选的特异性引物，建立了可以同时对Cf-5、Mi、Ty-1和Ty-2基因进行扩增的多重PCR技术，并通过多次重复试验，证明了该技术的准确性和适用性。该技术可以同时对番茄叶霉病、番茄根结线虫病和番茄黄化曲叶病毒病等相关基因进行分子标记筛选，将其与传统的育种方法相结合，可以快速的选育能同时抗三种病害、品质优良的番茄种质资源。4.应用本试验建立的多重PCR技术，对试验中繁育的三交种自交后代进行分子标记辅助筛选，剔除伪杂株、不能抗3种或3种以上病害的、生长状态不良的番茄材料，同时人工接种病原菌对剩余材料进行鉴定，然后保留DNA分子特异性标记与人工接种鉴定结果相符合的植株，最终筛选出了2株同时含有Cf-5、Mi和Ty-13种抗性基因，且能够抗番茄叶霉病、番茄根结线虫病和番茄黄化曲叶病毒病的番茄材料。该番茄材料抗逆性强，早熟性好，结实率高，是一种优良的番茄种质资源。