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鼻咽癌是一个多因素遗传性肿瘤,其发生发展具有多阶段性。遗传因素与环境因素共同作用致使与鼻咽癌相关的多个基因发生改变,从而导致鼻咽癌的发生和发展。它是我国常见的恶性肿瘤之一,在头颈部恶性肿瘤中占据首位。鼻咽癌在中国南方和国外中国南方移民及后裔中发病率极高,尤其是中国南方广东省鼻咽癌发病率较欧美等其他地区高25~30倍。这种惊人的地域性和民族性特征使鼻咽癌的防、诊、治在中国癌症研究中具有特殊重要的位置。
Hedgehog(Hh)信号通路是一个进化保守的信号通路,在从低等动物(果蝇)到高等动物(人类)中普遍存在。Hh信号通路最初的功能是胚胎发育的组织者,随后人们的研究又揭示了Hh在多种肿瘤的发生、分化、侵袭和转移中起关键性作用。Hh信号通路的异常激活,显著调节该通路下游目的基因的转录水平,可引起癌细胞的过度增殖和分化异常。在Hh信号通路中PTCH-1和SMO起着关键性的作用,Hh信号的接收和传导由位于靶细胞膜上的PTCH和SMO控制。
本研究选择Hh信号通路的PTCH-1和SMO作为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,检测鼻咽癌组织中PTCH-1和SMO基因的表达水平,通过与鼻咽炎患者的鼻咽组织相比较,探讨Hh信号通路与鼻咽癌发生之间的关系,以寻找鼻咽癌诊断和治疗的生物标志物。实验结果表明,在所检测的全部鼻咽癌组织和鼻咽炎组织中PTCH-1和SMO都有表达。与鼻咽炎组织相比,有75%(24/32)鼻咽癌组织的PTCH-1基因表达水平下调,有68.8%(22/32)鼻咽癌组织的SMO表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在鼻咽癌中SMO基因普遍具有较高的表达水平,PTCH-1基因的表达水平则相对较低,而SMO基因表达水平的上调及PTCH-1基因表达水平的下调,可引起Hedgehog信号通路在鼻咽癌中的异常激活,Hedgehog信号通路的异常激活可能与鼻咽癌的发生发展过程相关。
另外,在鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株中,定性的检测Hh信号通路PTCH-1和SMO基因的表达,验证在所检测的鼻咽癌细胞株中有Hh信号通路的激活。用Hh信号通路特异性抑制剂cyclopamine,在不同剂量和时间上分别作用于低分化及高分化鼻咽癌细胞株,通过CCK-8比色法检测细胞生长和增殖的情况。CCK-8比色法的结果显示,cyclopamine对CNE1和CNE2细胞有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,其中剂量效应关系较显著。Cyclopamine剂量低于5μmol/L时,对细胞抑制作用不明显;当剂量从5μmol/L增至40μmol/L时,随着剂量的增加和作用时间的延长,抑制作用也逐渐增强。通过观察cyclopamine对鼻咽癌细胞生物学行为的影响,可以为鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。
目前关于Hh信号通路在鼻咽癌的研究还处于探索阶段,需要更系统深入地研究Hh信号通路作用于鼻咽癌发病不同阶段的生物标志物,并在大样本的组织中进行验证,在临床试验进行有效评估,以推动实现鼻咽癌诊断和分子靶向性治疗的进程。