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目的：重型乙型肝炎发病率高，发病机制复杂，抢救治疗难度大，预后差，一直是医学研究攻关的重点。建立重型乙肝患者乙型肝炎病毒全基因扩增方法和探讨乙型肝炎病毒变异在重型乙型肝炎发病机制中的作用已成为现代医学研究中的重要课题。本试验目的旨在建立重型乙肝患者乙型肝炎病毒全基因扩增方法，发现重型乙肝患者乙型肝炎病毒基因的可能变异位点并探讨其临床意义。 方法：(1)模板制备：首先采用碱变性法、热处理法、蛋白酶消化—酚氯抽提法、柱式抽提法、辛酸钠法、CTAB处理法、PEG8000沉淀等7种不同方法，通过模板制备过程中杂质的去除效果、目的基因的得率、模板完整性的保持、对扩增反应敏感性的影响几个方面进行比较，寻找适合于重型乙肝患者进行乙型肝炎病毒全基因扩增的模板制备方法。(2)引物设计：选用不同位点设计的引物，对引物特异性和扩增效率进行比较，发现适合于全基因扩增的引物。(3)优化扩增反应条件：对不同的延伸时间进行对比研究，共进行35个循环。(4)将扩增产物克隆于pUCm-T载体中，进行序列测定和变异位点的分析，发现可能和重型乙肝发病有山西医才斗大学不芡d匕学t立示仑文关的变异位点。结果:(l)在7种不同的抽提方法中，PEGSO00沉淀法制备的模板，在目的基因得率、模板纯度和完整性方面均优于其它方法。(2)引物HBVLI/H BVLZ在特异性和扩增效率两方面均优于PI/P2。(3)经过优化发现最佳延伸时间是前25个循环延伸6min，后10个循环延伸1 Zmin。同以往文献报道一致。(4)通过试验，发现CP区多位点变异，特别是ntl764A一T、ntl766G一A点突变。 结论:PEG800o沉淀法能有效地去除血清中胆红素等Taq酶强抑制剂，避免了加热对模板的损伤，适用于对重型乙肝患者进行HBV全基因组扩增的模板制备;HBVLI/HBVLZ是目前进行全序列扩增的首选引物;测序结果提示S区插入变异和CP区变异可能和重肝的发生有关，应进一步研究。