论文部分内容阅读
在过继性实验性自身免疫性神经炎（AT-EAN）中 IL-12和IL-18的免疫发病机制和协同机制的研究 吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barre syndrome,GBS），又称急性炎性脱髓鞘性多发性神经病（acute inflammatory demyelinating polyneuropathies,AlDP），是以周围神经和神经根的节断性脱髓鞘及小血管周围淋巴细胞硬巨噬细胞的炎性反应为病理特点的自身免疫性疾病。用外周神经的髓鞘蛋白接种大鼠可以得到实验性自身免疫性神经炎（experimental autoimmune neuritis EAN）。EAN和GBS的临床病理以及神经电生理十分相似，是研究GBS的经典动物模型。体外培养的髓鞘抗原特异性T细胞静脉回输Lcwis鼠体内后，可以得到同样性质的神经炎，即过继性实验性自身免疫性神经炎（adoptive experimental autoimmune neuritis，AT-EAN）。目前认为EAN和AT-EAN的免疫发病机制是由细胞免疫调节失衡引起的针对外周神经特异性自身抗原的脱髓鞘性炎性疾病，这种自身免疫应答需要许多前炎症细胞因子发挥扳机样信号转导作用。 目的：研究IL-12和IL-18在AT-EAN中免疫发病机制以及它们之间的协同作用。 方法：用PO180-199多肽免疫Lewis大鼠建立EAN模型，取EAN大鼠的淋巴结和脾分离培养T细胞后，用PO180-199多肽体外刺激T细胞的增殖活化，使T细胞体外二次致敏，具有了针对PO180-199特异性抗原的免疫识别，免疫记忆和免疫应答能力。继续对PO180-199致敏T细胞分别给予IL-12或者IL-18或者联合给予IL-12+IL-18孵育后，回吉林大学博士学位论文中文摘要101输正常的Lewis大鼠，得到细胞因子干预的Af-EAN。对各组Al屯EAN进行临床和病理学评估，BLIsA法检测各组细胞培养上清和各组AFEAN血清中的细胞因子的表达，FACS法检测各组大鼠的脾淋巴细炮中eD4+T细胞和Cos+T细胞的计数，计算CD4+/Cr)s卜的比值。 结果: 1.和正常对照组Lewis鼠比较，EAN组和Al’- EAN组的Lewis鼠临床上表现出对称性上升性麻痹的症状，周围神经的病理学改变是一个节断性脱髓鞘的炎症损伤。 2.与回输Po，8压，99的阳性对照组Arl卫AN比较，IL一12组T细胞回输和比一18组rr细胞回输引发了临床和病理上更严重的Ar尽EAN，表现为临床发病提前，病情加重，恢复期延迟，外周神经的脱髓鞘面积增加，局部浸润的炎细胞数目增多，说明IL·12和【L一18均参与了户a飞EAN的免疫病理。而IL一12+IL一18联合孵育的PO::。一，99T细胞回输Lewis鼠后，得到的Al’- EAN临床症状和病理损伤最严重，和其他三组Al’- EAN比较，临床评分和病理学指标均有显著性差异伊<0 .05)。说明IL一12和IL一18在Al’- EAN的免疫病理损伤中有协同增强作用。 3.用ELISA方法检测PO一:o一卯对照组，IL一12组，IL一18组，IL一12+IL一18组四组T细胞培养上清中，IFN叮、TNF一a以及IL一的表达水平。结果显示，和P01:卜:，对照组比较，IL一12组和IL一12+IL+18组的IFN一丫的水平有显著性提高（P<0 .05），IL一18组和IL一12+IL一18组的TNF一a的水平有显著性提高（P<0.05），其中IL12+I L18组的IFN咋的表达的上调和其他三组比较均有显著的提高（P<0 .01）。细胞因子干预的三组的IL一4的表达水平和Po18。一199对照组比较，均有下调，但是没有统计学意义（P>0.05）。吉林大学博士学位论文中文摘要l（，之 4.用ELIS八方法检测PO，8。一，99对照组，IL一12组，IL一18组，IL一12+IL一18组四织的Al’- EAN的血清中的IFN叮、翎F一a以及IL一4的表达水平，结果和上清中的结果基本一致，表明这种细胞因子的水平的调节是体外的细胞因子的千预的结果。 5.用队CS训一数各组Al）EAN的脾细胞中的CD4+T细胞和CDS+T细胞的绝对数口和比例，和PO!:0一，。9对照fl1比较，IL一22组的en4+T细胞数目增多，CDS’一T细胞的数目增多（P>0.仍）。IL一18组的CD4十T细胞数目增多，cDS十T细胞的数目减少（P>0.05）。IL一12+IL一18组的cD4’T细胞数日显著增多（P<0.05），cDS+T细胞的数目显著减少（P<0.05）。只有IL一2+IL一18组.}‘!勺eD4+/ ens+的比值和Polso一:99对照组相比有显著咨性差异（P<0.05）。 结论: 1.用P。:80一199直接接种动物或者通过淋巴细胞致敏后静脉回输动物均可以得到实验性自身免疫性神经炎，即EAN和Al’- EAN。 2.采用IL一12和/或IL一18体外孵育POI:。一199T细胞后回输体内的研究方法，可以研究细胞因子对户a屯EAN产生的干预的影响作用。 3.IL一12和IL一18均参与了Al’- EAN的免疫病理损伤。 4.IL一12主要是通过IFN一Y参与了AT-EAN的免疫发病机制，而IL一18则主要是通过TNF一a参与了Al:EAN的发病机制。 5.IL一12和IL一18在Al’- EAN有显著的协同增强作用，这种作用主要是通过协同产生大t的IFN一丫实现的。 6.IL一12和IL一15均诱导T en4+T细胞的增殖分化，它们对en4+T细胞的分化增殖的诱导作用可以相互协同性增强。