糖基化是一种重要且广泛存在的翻译后修饰,糖基化修饰的缺损是许多疾病的一个标志,如肿瘤的发生发展、自身免疫性疾病以及某些遗传性疾病等,已成为目前蛋白质组学研究的活跃领域。由于糖链结构的多样性和微不均一性,目前为止从复杂的生物样品体系中富集糖蛋白/糖肽是蛋白质糖基化研究的重点和难点。本论文以基于点击化学的磁珠富集糖蛋白以及细胞的代谢标记为主要内容,探索了糖蛋白富集和分析的新方法。本实验室制备了一种二硫键及末端炔基修饰的磁性纳米材料,可通过化学点击反应特异性的富集叠氮修饰的糖肽或糖蛋白。本论文以该磁珠为工具,首先优化和建立了磁珠富集叠氮糖肽的反应条件,证明了磁珠富集叠氮糖肽的有效性。其次,本论文建立了糖链的代谢标记方法和检测方法。叠氮修饰的单糖如四乙酰化叠氮半乳糖胺(Ac4Gal NAz)被细胞利用进入细胞内的糖代谢,从而使细胞内的糖蛋白标记上叠氮基团,再通过叠氮和膦或炔基间的点击化学反应可实现对标记蛋白的检测。最后用磁珠富集已标记细胞的糖肽和糖蛋白。标记细胞的全蛋白酶解成肽段后用磁珠能特异性的捕获;同时磁珠也可直接富集叠氮糖蛋白,结合银染和凝集素印迹证明了磁珠富集糖蛋白的有效性。最后结合质谱技术,以期能利用磁珠富集方法检测和鉴定细胞内的糖蛋白,为O-糖基化富集方法的进一步研究奠定了基础。