利用原位杂交技术研究仔猪小肠FcRn表达及分布规律

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为了研究FcRn mRNA在仔猪小肠内的分布和表达,本文建立了地高辛标记探针的原位杂交方法,并且以0d,1d,2d,3d,4d,7d,10d, 14d, 21d, 28d和35d等不同日龄的大白和长白杂交二元仔猪作为研究对象,检测了FcRn mRNA在仔猪小肠内的定位和半定量表达规律。主要结果如下:1.仔猪小肠原位杂交方法的建立:根据GenBank公布的猪FcRn重链(α链)mRNA基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cDNA探针,确定仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14μm;仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶,3%的H2O2溶液祛除该酶的效果良好,但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响,无需祛除;在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织中均检测到清晰的杂交信号。2.仔猪小肠FcRn mRNA的定位:利用建立好的原位杂交方法,经定位分析检测到粘膜上皮、粘膜固有层和粘膜下层三个部位有FcRn mRNA阳性表达。3.仔猪小肠FcRn mRNA的半定量:不同日龄仔猪小肠FcRn mRNA表达水平为:0d-2d FcRn mRNA表达水平最高,以后逐渐降低,21d之后又逐渐回升;0d已吃乳的表达量明显高于0d未吃乳。不同组织仔猪小肠FcRn mRNA表达水平为:十二指肠和空肠的FcRn mRNA表达水平高于回肠。
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