第一部分：RSKA/hIGF-Ⅰ重组质粒的构建及表达　　 人胰岛素样生长因子-1(human insulin-like growth factor-Ⅰ, hIGF-1)的主要作用是调节细胞、组织的生长发育和再生，在骨骼肌中的作用是促进未成熟和受损伤的骨骼肌的成熟和再生。随着基因转染技术的发展，将外源性基因导入特定的靶细胞或组织中使之稳定高效表达，并发挥其作用已成为可能。本实验即是以真核表达质粒PBluescriptⅡSK(+)为载体，构建携hIGF-1编码基因的真核表达质粒PBS-RSKA/hIGF-1，通过基因转染使其稳定表达，为治疗骨骼肌萎缩提供了一种新的方法和思路。　　 目的：构建携带RSKA/hIGF-Ⅰ杂交基因的重组真核表达质粒并在C2C12细胞内表达，为进一步研究骨骼肌萎缩的基因治疗提供依据。　　 方法：登录Genbank数据库，查找大鼠骨骼肌α-肌动蛋白(RSKA)启动子序列、人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)cDNA序列和人生长激素(hGH)3′尾端非编码区序列(3UTR)，把三段基因序列拼接后进行全基因合成，再将合成的全基因融合到PBluescriptⅡ SK(+)质粒上。用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列的正确性；重组质粒转染C2C12细胞，RT-PCR鉴定转染细胞中hIGF-1 mRNA的表达；WesteBlod鉴定转染细胞中hIGF-1的表达。　　 结果：重组质粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切图谱与预期相同，而且测序验证插入片段全序列无改变。转染细胞RT-PCR及Western Blot有特异条带出现且差异显著。　　 结论：成功构建携RSKA/hIGF-1杂交基因的重组质粒并在C2C12细胞中正确表达。　　 第二部分：聚乙烯亚胺介导的RSKA/hIGF-Ⅰ基因延缓失神经骨骼肌萎缩的实验研究　　 周围神经高位损伤后，修复后疗效较差，主要原因之一是肌肉获得神经再支配前已经萎缩；因此，如何预防失神经肌肉的萎缩，已经成为研究的热点。随着基因技术的不断发展，使失神经肌萎缩的基因治疗成为可能，本实验即是在成功构建真核高效表达质粒PBS-RSKA/hIGF-1的基础上，将其转染到失神经支配的腓肠肌内，探讨基因治疗失神经肌萎缩的效果。　　 目的：观察聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine，PEI)介导的RSKA/hIGF-Ⅰ杂交基因在大鼠体内转染延缓失神经肌萎缩的效果。　　 方法：体重180～200g的雄性SD大鼠72只随机分为4组：生理盐水对照组(A)，RSKA/hIGF-Ⅰ早期转染早期修复组(B)；RSKA/hIGF-Ⅰ早期转染延期修复组(C)、延期转染延期修复组(D)。所有大鼠均建立右侧坐骨神经损伤模型，转染治疗组于伤侧腓肠肌中央多点注射PBS-RSKA/hIGF-1/PEI混合试剂，对照组以生理盐水代替PBS-RSKA/hIGF-1注射。转染后分别于1、5、12周检测坐骨神经传导速度、腓肠肌复合动作电位、腓肠肌最大强直张力，腓肠肌湿重、腓肠肌肌细胞横截面积，hIGF-1 RT-PCR和ELISA并观察hIGF-1免疫组化染色。　　 结果：①大体形态：延期修复组在神经修复1周时腓肠肌形态较同期对照组和早期修复转染组明显萎缩，但随着时间的延长，在12周时延期修复组形态优于对照组，稍差于即时修复转染组。②电生理学指标：坐骨神经传导速度、腓肠肌复合动作电位及腓肠肌最大强直张力在神经修复后1、5、12周时恢复由优到差依次为：B组、C组、D组、A组。③腓肠肌湿重和腓肠肌肌细胞横截面积在神经修复后1、5、12周时，B组优于A组，C组优于D组，D组优于A组。④hIGF-1免疫组化染色、mRNA RT-PCR和IGF-1 ELISA表明：重组质粒转染1周后，IGF-1的表达明显高于对照组，5W、12W IGF-1表达相对有所降低，但转染组仍高于对照组。　　 结论：PEI介导的RSKA/hIGF-Ⅰ杂交基因体内转染可以有效延缓骨骼肌失神经萎缩。