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第一部分 NMNAT2在结直肠肿瘤中的表达及其临床意义目的:探讨结直肠癌组织中NMNAT2蛋白的表达及其临床意义。方法:收集结直肠癌及癌旁组织标本95例,经固定、包埋、切片后,免疫组化检测NMNAT2蛋白在癌及癌旁组织中的定位及表达水平,分析两蛋白可能存在的相关性,系统收集统计标本的各项临床参数和随访资料,分析NMNAT2的表达与各临床参数间的关系,利用Kaplan-Meier法及log-rank检验进行生存率的比较,并建立COX回归模型进行单因素及多因素生存分析,以判断NMNAT2是否为影响患者生存时间和疾病预后的因素。结果:1、NMNAT2蛋白主要定位于结直肠癌细胞胞质,其在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常结直肠组织。2、NMNAT2蛋白随肿瘤浸润程度、TNM分期进展呈递增表达,其表达量与性别、肿瘤大小等其他临床参数无关。3、NMNAT2蛋白呈阴性和阳性表达的患者术后生存率无统计学差异,COX单因素回归分析显示,年龄、肿瘤大小、形态类别、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期是影响患者生存时间的独立风险因素,多因素回归分析则提示,肿瘤大小、形态类别及TNM分期为共同影响预后的因素,而NMNAT2的表达对预后的影响无统计学意义。结论:1.NMNAT2的特异性高表达参与了结直肠肿瘤的发生发展,可能是结直肠肿瘤新的促癌基因,有望成为结直肠肿瘤诊断及治疗的新靶点。2.NMNAT2表达量对结直肠肿瘤患者的术后生存率无差异性影响,也不是结直肠肿瘤的独立风险因素,尚不能认为结直肠肿瘤中NMNAT2的表达水平可以判断预后。第二部分 NMNAT2和SIRT6在结直肠肿瘤中表达的相关性及其临床意义目的探讨NMNAT2和SIRT6在结直肠肿瘤组织中表达的相关性及其临床意义。方法收集29例患者结直肠癌及癌旁新鲜组织标本,Western blotting和RT-qPCR检测癌及癌旁组织中,SIRT6、NMNAT2蛋白和mRNA的表达水平。分析SIRT6在结直肠癌组织中的表达特性及与NMNAT2表达水平的相关性。收集结直肠癌和癌旁组织标本113例(含前29例),经固定、包埋、切片后,免疫组化检测SIRT6、NMNAT2蛋白在癌及癌旁组织中的定位及表达,分析SIRT6与NMNAT2与临床参数相关性,探讨两蛋白在结直肠癌临床进展作用关系及对临床诊疗的意义。结果1.Western bloting检测表明,结直肠癌组织与癌旁组织相比SIRT6蛋白表达显著降低,NMNAT2表达则是癌组织中的表达明显高于癌旁组织。2.免疫组化显示,SIRT6蛋白主要表达于癌旁正常组织细胞核内,SIRT6在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织。3.与癌旁组织相比,SIRT6mRNA在癌组织中的表达显著降低。NMNAT2 mRNA在癌组织的表达高于癌旁组织。4.SIRT6与NMNAT2的蛋白及mRNA表达分析柱状图呈明显负相关表达趋势,免疫组化数据发现癌组织中两蛋白的表达存在统计学负相关(r=-0.246)。5.SIRT6蛋白在不同的分化程度、淋巴结转移及TNM分期的癌组织的呈差异表达,表达量与年龄、肿瘤大小等其他临床参数无关。结论:1.结直肠癌多基因改变进程中存在SIRT6基因的表达缺失,SIRT6蛋白表达水平可成为预测患者肿瘤进展阶段及预后的参考指标。2.结直肠癌组织中NMNAT2和SIRT6蛋白的表达存在统计学负相关性,同时参与了肿瘤的进展,SIRT6可能是NMNAT2参与结直肠癌临床进展的调控因素之一,开辟了研究NMNAT2作用于结直肠癌的发生发展机制的新路径。