目的 卵巢癌是严重威胁妇女生命健康的恶性肿瘤，其死亡率占妇科肿瘤的首位。化疗在卵巢癌治疗中占有重要地位，但耐药性的产生使得化疗对卵巢癌的总体生存率的改善并不乐观。细胞生物学认为：细胞的永生化是细胞癌变的必经之路。而端粒酶在机体不协调的活化，可以使端粒延长，这是产生细胞不死化的根源。 本实验通过检测顺铂敏感株和耐药株在经顺铂处理前后的端粒酶活性变化，并通过抑制端粒酶的活性，了解端粒酶抑制剂对于顺铂不同敏感性的卵巢癌细胞株的影响，试图从一个新的角度寻找解决常规化疗耐药问题的方法。 材料和方法 一、细胞株：采用对铂类化疗药物敏感的人卵巢上皮性癌细胞株A2780，对铂类化疗药物耐药的人卵巢上皮性癌细胞株CAOV3和OVCAR3。 二、细胞培养：使用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养液培养细胞，将细胞浓度调整至2×10⁴／ml，取0.1ml细胞悬液加入96孔培养板中培养。 三、药物：CDDP、AZT、ATRA 1、三种细胞株分别在1×10^-5M、3×10^-5M、5×10^-5M、8×10^-5M、10×10^-5M CDDP中培养24小时。 2、三种细胞株分别在3×10^-4M、6×10^-4M、10×10^-4M，或4×10^-5M、6×10^-5M、8×10^-5M AZT中培养4天。 3、三种细胞株分另 10－’M、10－’M、10－‘M Ah培养6 X 四、药物对细胞增殖抑制作用和端粒酶活性的检测 药物对细胞增殖抑制作用使用MTh方法检测，细胞增殖抑制率用公式＊－OD删／OD＃＊ X 100表示。每个实验重复一次。 端粒酶活性采用TRAP－EllSA方法进行检测，用端粒酶产物总量O PrDdllCt geneed，TPG)来表达： TPG ＝一川h－B)／i］／［（R－B）／RI］IX 100。 TP在、TIs和RI分别代表待测样本的吸光度值、单纯的裂解缓冲液的吸光度值、待测样本的内对照、标准对照的吸光度值和标准对照的内对照。每个样本重复检测4次。 五、统计学处理 数据使用均值上标准差K土S)表示。用析因设计的方差分析检验药物对不同种细胞作用的差异性。用直线回归分析方法检测药物的剂量效应关系。P＜o．防为有统计学意义 结 果 一、未加处理因素时，敏感株A2780和耐药株CAOV3。OVCAR3的端粒酶活性没有明显差别，经 5 X 10十M CDDP处理后敏感株A2780的端粒酶活性明显降低，而耐药株CAOV3和OVCAR3的端粒酶活性没有明显变化。 二、对于 A2780和 CAOV3，3 X 10－‘M、6 X 10－‘M、10 X 10’‘M的Ay’可以明显的抑制其细胞增殖和端粒酶活性，且存在剂量效应关系。该药对敏感株A2780和耐药株CAOV3的作用没有差别。而对于 OVCAR3，4 X 10‘’M、6 X 10－’M、8 X 10－’M的 Ay’就可以明显抑制细胞的增殖，但此浓度的Ai’对OyCAR3的端粒酶活性无明显作用。 三、对于 A2780和 CAOy3／＊M＊一M的 ATRA可以明显 ·2·的抑制细胞的增殖和端粒酶活性。并且该药对敏感株A2780和耐药株OyCAR3的作用没有差别。 结 论 l、CDDP对敏感株和耐药株细胞的增殖抑制作用有显著差异。 2、CDDP处理前敏感株和耐药株的端粒酶活性没有明显差异。经CDDP处理后，敏感株的端粒酶活性明显降低，而耐药株的端粒酶活性没有明显变化。 3、反转录酶抑制剂AZT可以抑制卵巢癌细胞株的端粒酶活性和细胞的增殖，并且存在剂量效应关系。 4、分化诱导剂ATRA可以抑制卵巢癌细胞株的端粒酶活性和细胞的增殖。 5、通过抑制端粒酶活性，可以抑制CDDP敏感株和耐药株的细胞增殖，并且对敏感株和耐药株的影响没有明显的差别。