目的:骨生长发育及骨折愈合过程一直是骨科研究工作的重点。目前已发现许多细胞因子的表达与骨发育过程相关。蛋白酶Corin的研究主要集中在心血管及妊娠疾病方面,而它同时也在软骨衍化的骨组织中表达,但是其在骨骼发育过程中的生理作用却一直未明确。我们前期研究中发现,Corin在人骨髓间充质干细胞软骨分化的过程中起重要的调节作用;骨质疏松患者的外周血中,可溶性Corin的水平降低,且其水平与骨密度值呈负相关。本实验旨在通过对Corin敲除小鼠骨发育及股骨骨折模型的研究,探讨Corin缺失后对骨发育及骨损伤修复过程的影响,并为作用机制研究奠定基础。方法:1.Corin在小鼠骨发育中的影响(1)大体标本检测:分别采集野生型(WT)及Corin基因敲除型(Corin KO)出生时的P0小鼠,使用阿尔新蓝(Alcian blue,软骨)和茜素红(Alizarin red,骨)染色方法行小鼠标本染色,观察两组小鼠骨发育的大体情况;(2)长骨检测:使用体式显微镜测量上述染色后小鼠的胫骨、股骨、尺骨及肢骨的长度,统计分析两组长度间的差异;(3)qPCR:提取WT组与Corin KO组P0小鼠胫骨RNA,逆转录获取cDNA,使用qPCR方法检测成熟肥大软骨细胞标志物VEGF和MMP13的表达。2.Corin缺乏对骨损伤修复的影响(1)选用成年(8-12周)的WT及Corin KO小鼠,制作小鼠闭合股骨骨折模型,分别于术后2W、4W、6W及8W取出股骨标本;(2)通过钼靶摄像评估骨痂面积;Micro-CT扫描骨痂并行三维重建,分析骨痂愈合的影响;(3)对骨痂切片行蕃红O/固绿染色,观察骨痂结构的差异。结果:(1)阿尔新蓝-茜素红染色P0小鼠标本后行长骨长度检测,经统计发现Corin KO组小鼠胫骨、股骨、尺骨及肱骨长度较WT组明显缩短(p<0.05)。(2)取P0小鼠胫骨,qPCR检测MMP13及VEGF表达,Corin KO组较WT组明显减少(p<0.05)。(3)通过X线检查计算骨痂面积,术后2W、4W及6W,Corin KO组面积与WT组相比较大(p<0.05),而在术后8W时,两组骨痂面积没有显著差异(p>0.05)。(4)经Micro-CT扫描重建后统计BV、BVF。术后各时间点检测,两组BV逐渐升高,WT组的BV均高于Corin KO组;在2W、4W时,两组间BVF间无统计学差异(p>0.05),在 6W 及 8W,WT 组的 BVF 值显著高于 Corin KO 组(p<0.05)。(5)切片组织学染色后,术后2W时WT组骨折端周围已形成了多量的软骨性骨痂,在边缘处的骨痂已经部分骨化;Corin KO组见大量软骨细胞聚集。结论:在本研究中发现,骨发育过程中,Corin的缺乏导致小鼠的长骨发育延迟,肥大软骨细胞成熟滞后;骨修复过程中,Corin缺失使愈合过程延迟,且骨痂质量下降。