鉴于目前培养原代绵羊瘤胃成纤维细胞（ovine ruminal fibroblasts cells,ORFCs）工作量较大,程序较复杂,并且从瘤胃组织分离出的ORFCs成活的时间有限,具有可数的传代代次,因此建立永生化的ORFCs就非常重要。本次试验设计为:把人源端粒酶逆转录酶基因质粒（PCI-neo-hTERT）转染到绵羊瘤胃成纤维细胞内,使原代ORFCs中外源人源端粒酶逆转录酶基因（human Telomerase Reverse Transcriptase,hTERT）表达量上升,来促进端粒酶的活性,进而维持染色体端粒的长度,使正常状态下快速死亡的原代细胞分裂次数变多甚至永生化。利用G418选择性培养基,从转染的ORFCs中筛选出阳性克隆。筛选出的阳性克隆通过反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）的检测方法,在基因水平和蛋白水平检测绵羊瘤胃成纤维细胞中的hTERT的转录及表达。再通过血球计数板计数法绘制阳性克隆的生长曲线。通过以上试验,我们获得了原代的ORFCs,并将携带有hTERT基因的质粒成功转入到ORFCs中,得到阳性克隆细胞。后续利用RT-PCR和WB检测到阳性克隆细胞中的hTERT基因表达显著。通过绘制生长曲线,显示永生化的ORFCs具有更强的细胞分裂能力。鉴于以上试验结果,我们认为本试验成功获得了永生化的绵羊瘤胃成纤维细胞。为后续利用单质粒系统转染其它细胞使其永生化提供了思路。