一、研究背景和目的
　　原发性肝癌(primarycarcinomaoftheliver)是我国常见恶性肿瘤，在男性癌症相关死因中位居第2位，在女性中位居第7位[1]。巨噬细胞是主要的免疫调节和免疫应答细胞，广泛存在于机体各种组织中，具有抗感染、抗肿瘤和参与免疫应答、免疫调节等生物学功能。在肿瘤微环境的细胞成分中，巨噬细胞占据了其中的核心地位，统称为“肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associatedmacrophages，TAMs)”[2]。TAMs与肿瘤的浸润转移与肿瘤血管生成、侵袭转移、上皮一间充质转化(EMT)以及抵抗免疫损伤等密切相关，在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。如何从肝癌组织中分离、获取大量巨噬细胞是进行体外研究的关键，目前国内对于肝癌组织原代巨噬细胞的研究比较少。通过用佛波酯(PMA)、白细胞介素4诱导THP-1是目前常用的TAMs体外实验模型。故我们一方面通过体外诱导TAMs，另一方面希望摸索出在人肝癌组织的标本中提取TAMs的有效方法，研究其对肝癌侵袭转移能力的影响，为进一步研究提供实验基础。
　　二、研究方法
　　1、体外诱导TAMs：采用PMA及IL-4将THP-1诱导成为M2型巨噬细胞，WesternBlot检测CD68及CD206的表达情况。
　　2、原代巨噬细胞的提取及鉴定：免疫组化法检测肝癌组织中TAMs表面标志物CD68及CD206的表达。在肝癌组织中提取原代巨噬细胞，显微镜观察细胞形态，流式细胞检测鉴定细胞纯度。
　　3、TAMs对人肝癌细胞HepG2侵袭转移能力的影响：将处于对数生长期的HepG2细胞接种于Transwell培养板（滤膜孔径8μm）上室，将TAMs培养上清液吸入下室，孵育24h，观察TAMs对HepG2侵袭转移能力的影响。采用酶联免疫吸附（Elisa）法检测TAMs和HepG2培养上清液细胞因子IL-6的表达。
　　三、实验结果
　　1.体外诱导TAMs
　　PMA及IL-4将THP-1诱导成为M2型巨噬细胞，WesternBlot检测巨噬细胞特异性标志物CD68及CD206阳性。
　　2.原代巨噬细胞的提取及鉴定
　　（1）癌巢和癌旁组织免疫组化染色中，CD68、CD206均可见表达。
　　（2）巨噬细胞贴壁培养24h后，用倒置显微镜微镜可观察到贴壁生长的巨噬细胞，经流式检测CD68和CD206的表达阳性，表明原代巨噬细胞提取成功。
　　3.TAMs对人肝癌细胞HepG2侵袭转移能力的影响
　　（1）TAMs促进HepG2细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。
　　（2）TAMs培养上清液中检测到IL-6表达，而HepG2培养上清液无IL-6表达。
　　四、结论
　　本研究成功地在体外诱导M2型巨噬细胞，并成功将肝癌组织的原代TAMs提取进行体外培养。TAMs分泌细胞因子IL-6，并对肝癌细胞的侵袭转移有促进作用。