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Ⅳ型胶原酶是降解细胞外基质骨架蛋白Ⅳ型胶原的主要酶之一,其生理功能主要是参与伤口愈合,生殖以及生殖器官的复旧等。研究发现Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭和转移、自身免疫性疾病、牙周疾病以及肿瘤组织的血管生成密切相关。鉴于Ⅳ型胶原酶的重要病理生理功能,本研究旨在建立一种快速、准确、低成本的高通量显色法检测血浆Ⅳ型胶原酶活性,探讨健康人群血浆中活性形式Ⅳ型胶原酶的正常值范围及其含量与疾病疗效、预后的相互关系。采用以琥珀酰明胶作为酶切底物,三硝基苯磺酸钠显色剂对酶切产生的末端氨基显色的方法,使用酶标仪在405 nm处测量吸光度。通过对其显色剂用量、显色稳定性和最佳检测波长等因素进行探讨,得出测定血浆Ⅳ型胶原酶的最优分析条件,并采用回收实验、精密度实验、与双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行方法学对照等方法对其进行方法学评价。采用该方法检测了112名健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量。使用SPSS软件进行统计学分析,建立健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量双侧95%可信区间。跟踪检测91例恶性血液病患者及17例再生障碍性贫血患者在初发病、首次治疗及再次治疗后血浆Ⅳ型胶原酶含量,并探讨其含量在疾病治疗前后的变化规律。显色法检测血浆Ⅳ型胶原酶,总测定时间<1.5h,线性范围1.5~10.0 mg/L,最低检出限为0.965 mg/L,与ELISA法相关性良好(R2=0.9997,P<0.01),批内变异系数<3.564%,批间变异系数<9.821%。血浆样本回收率为血浆样本回收率分别为99.23%~107.59%。健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量双侧95%的可信区间为33.38~49.80 mg/L。恶性增殖性/抑制性血液病初犯时血浆Ⅳ型胶原酶含量均异常增高/降低,采用化疗方案治疗缓解后血浆Ⅳ型胶原酶含量有不同程度下降/升高。该方法一改原来依赖标记抗体显色的原理,而是单纯利用底物的酶切产物显色的原理来检测血浆中Ⅳ型胶原酶含量。该测定法可以应用于检测血浆中活性形式Ⅳ型胶原酶的含量,血浆中该含量的检测可以对疾病的发展及预后做初步估计,并建立了健康人血浆Ⅳ型胶原酶含量正常值参考区间。