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目的:脑卒中已跃升为我国疾病死因的首位,其中85%以上卒中为缺血性脑卒中(脑梗死)。重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)是目前急性脑梗死最有效的治疗药物,但由于狭窄的时间窗及有出血转化风险,从中受益者有限,因此,有必要进一步探索新的治疗药物及手段。众多研究表明,调节性T细胞(Treg)在缺血性脑损伤的病理生理过程中起着重要的作用。脑缺血后外周的Treg细胞能通过损伤的血脑屏障进入脑中,通过分泌抗炎症介质白介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)调节缺血脑组织的炎性微环境。通过输入Treg细胞或药物上调Treg细胞水平可显著减轻缺血性脑损伤。因此,上调Treg细胞水平可能是治疗缺血性脑损伤的一种有效策略。此外,有研究发现LXA4可提高Treg细胞水平;拮抗P2X7受体能显著提高Treg细胞水平。BML-111是一种脂氧素A4(LXA4)类似物和LXA4受体激动剂。而LXA4是花生四烯酸经脂加氧酶催化通过跨细胞合成途径生成的一种内源性抗炎和促进炎症消退介质,可与LXA4受体相结合从而发挥强大的抗炎作用。我们前期研究证实,LXA4可通过发挥抗炎效应,改善局灶性脑缺血损伤。BML-111是人工合成的、性质更为稳定的脂氧素A4类似物,具有与LXA4作用受体一致的优点。众多实验证实BML-111同样具有抗炎、抗凋亡等多种生物学效应。新近研究发现,给予BML-111可显著改善脑梗死体积,但其具体的作用机制尚不清楚。本研究通过观察BML-111对神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑组织病理损伤、IL-10和TGF-βmRNA表达、Treg细胞比例变化以及P2X7受体表达的影响,进一步探讨BML-111发挥神经保护作用的潜在机制,为其临床应用提供实验室依据。方法:60只健康雄性Sprague-Dawley大鼠(8-10周龄,280-320 g)随机分为4组,15只每组:假手术(SHAM)组、脑缺血(CI)组、BML-111组和BML-111+BzATP(P2X7受体激动剂)(BzATP)组。通过改良Longa线栓法建立永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)模型。于造模前30 min,给予BzATP组大鼠左侧侧脑室注射BzATP(5μL,1μg/μL),其余三组大鼠均左侧侧脑室注射相同体积的生理盐水。于pMCAO造模后3 h、24 h及48 h,予BML-111组和BzATP组大鼠左下腹腹腔注射BML-111(1 mg/kg);SHAM组和CI组于相同时间点给予左下腹腹腔注射相同体积的生理盐水。于pMCAO造模后72 h,评估大鼠的神经功能缺损;随后处死大鼠,行2,3,5-氯化二苯四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑组织中抗炎细胞因子IL-10和TGF-βmRNA表达水平;流式细胞术检测脑组织中Treg细胞比例变化;免疫组织化学法检测脑组织中P2X7受体平均光密度值(MOD);以及Western blot(WB)法检测脑组织中P2X7受体表达水平。结果:1.神经功能缺损评分:SHAM组无神经功能缺损症状,其余各组均有不同程度的神经功能缺损症状。与CI组相比,BML-111组神经功能缺损评分显著降低(P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组神经功能缺损评分显著升高(P<0.05)。2.脑梗死体积:SHAM组大鼠脑组织行TTC染色后未见梗死灶,其余各组均见不同范围的白色梗死区。与CI组相比,BML-111组梗死体积显著减少(P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组梗死体积显著增加(P<0.05)。3.HE染色:SHAM组脑组织整体结构完整,其余各组脑组织结构均有不同程度的损伤。神经毡不同程度的软化,神经元细胞不同程度的破坏,部分胶质神经细胞伴有空泡样变化。与CI组相比,BML-111组病理损伤形态程度有所减轻;而与BML-111组相比,BzATP组病理损伤形态程度有部分加重。4.IL-10和TGF-βmRNA表达:与SHAM组相比,CI组IL-10和TGF-βmRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.05);与CI组相比,BML-111组IL-10和TGF-βmRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组IL-10和TGF-βmRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.05)。5.Treg细胞比例:与SHAM组相比,CI组Treg细胞比例显著升高(P<0.05);与CI组相比,BML-111组Treg细胞比例显著升高(P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组Treg细胞比例显著降低(P<0.05)。6.P2X7受体MOD:与SHAM组相比,CI组P2X7受体MOD显著升高(P<0.05);与CI组相比,BML-111组P2X7受体MOD显著降低(P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组P2X7受体MOD显著升高(P<0.05)。7.P2X7受体表达:与SHAM组相比,CI组P2X7受体表达显著升高(P<0.05);与CI组相比,BML-111组P2X7受体表达显著降低(P<0.05);而与BML-111组相比,BzATP组P2X7受体表达显著升高(P<0.05)。结论:1.BML-111对大鼠缺血性脑损伤具有显著的神经保护作用。2.通过抑制P2X7受体表达,进而提高Treg细胞比例,从而增加IL-10、TGF-β的分泌,可能是BML-111发挥神经保护作用的重要机制之一。