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目的：本实验室前期研究发现二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）可通过下调人胃癌MGC803细胞LIMK1（LIM Kinase1, LIMK1）抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭，利用RNA干扰LIMK1可增强DADS抑制MGC803细胞的侵袭能力。本研究通过构建LIMK1高表达人胃癌MGC803细胞系，旨在探讨LIMK1高表达对DADS抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法：构建含有编码人LIMK1基因CDS序列的pIRES2-EGFP/LIMK1真核表达载体，将载体转染MGC803细胞，建立LIMK1蛋白稳定高表达的LIMK1/MGC803细胞系。通过RT-PCR技术检测转染细胞中LIMK1mRNA和LIMK1蛋白的表达水平。通过MTT法、流式细胞周期检测术、划痕实验、Transwell侵袭小室实验及裸鼠移植瘤实验，检测DADS处理前后，LIMK1高表达对MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和成瘤能力的影响。利用Western blot和RT-PCR检测DADS处理前后，调控LIMK1对cofilin1磷酸化的影响。结果：1.成功建立稳定LIMK1高表达的LIMK1/MGC803细胞。经双酶切和测序结果检测，确定pIRES2-EGFP-LIMK1真核表达载体成功构建。将pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-LIMK1真核表达载体分别转染MGC803细胞，采用荧光显微镜观察转染细胞，可见绿色荧光，确定pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP/LIMK1导入MGC803细胞。利用RT-PCR和Western blot验证转染结果，结果表明LIMK1/MGC803细胞中LIMK1mRNA和蛋白表达量增高，提示成功构建LIMK1高表达的稳定细胞系LIMK1/MGC803。2. LIMK1高表达对MGC803细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。MTT和流式细胞术检测结果显示， LIMK1/MGC803细胞增殖能力较MGC803细胞和pIRES2-EGFP/MGC803细胞明显增强（P<0.05），表明LIMK1高表达可促进MGC803细胞增殖。DADS可抑制LIMK1/MGC803细胞和MGC803细胞的增殖能力，并阻滞细胞于G2/M期（P<0.05）。干扰LIMK1可抑制miRi-LIMK1/MGC803细胞的增殖能力（P<0.05）。划痕实验和侵袭实验结果显示，LIMK1/MGC803细胞迁移、侵袭能力较MGC803细胞和pIRES2-EGFP/MGC803细胞明显增强（P<0.05）。DADS可抑制LIMK1/MGC803细胞和MGC803细胞迁移侵袭。3. DADS处理与LIMK1高表达后对MGC803细胞LIMK1、Cofilin1表达及Cofilin1磷酸化的影响Western blot和RT-PCR结果显示，LIMK1/MGC803细胞LIMK1mRNA和蛋白表达水平明显高于MGC803细胞和pIRES2-EGFP/MGC803细胞（P<0.05）。LIMK1/MGC803细胞Cofilin1mRNA和蛋白表达水平与MGC803细胞和pIRES2-EGFP/MGC803细胞相比，差异无显著性意义（P>0.05）。LIMK1/MGC803细胞Cofilin1蛋白磷酸化水平明显高于MGC803细胞和pIRES2-EGFP/MGC803细胞（P<0.05）。4. DADS与LIMK1对MGC803细胞裸鼠成瘤能力的影响裸鼠成瘤结果显示，各DADS处理组的移植瘤体积、瘤重与相应未处理组相比均有显著性差异（P<0.05），提示DADS可抑制MGC803细胞的成瘤能力。LIMK1/MGC803组、miRi-LIMK1/MGC803与MGC803组相比，均有显著性差异（P<0.05），表明LIMK1高表达可增加MGC803细胞的成瘤能力，干扰LIMK1可抑制MGC803细胞的成瘤能力。结论：1. LIMK1高表达可促进MGC803细胞的增殖、迁移与侵袭。2. LIMK1高表达可减弱DADS对MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。3. LIMK1高表达可上调cofilin1的磷酸化水平。4. DADS可抑制MGC803细胞的成瘤能力，而LIMK1高表达与沉默分别增加与降低MGC803细胞的成瘤能力。