肺癌是全世界癌症死亡的主要原因,非小细胞型肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌的主要类型。目前针对早期NSCLC的治疗方法主要为手术治疗,晚期NSCLC常选择包括靶向治疗和放化疗在内的联合疗法。双皮质素样激酶蛋白1（Doublecortin-like kinase 1,DCLK1）是肿瘤干细胞的标志物,在多种癌症中高表达,并且是癌症治疗的激酶靶点。虽然有多种小分子激酶抑制剂已经被证实对于DCLK1激酶存在抑制作用。然而,至今为止,DCLK1的靶向药物的发展仍处于临床实验阶段。我们通过体外激酶实验,发现ERK5-IN-1能够与DCLK1激酶结合,并且抑制其活性。有文献报道DCLK1与肺癌的进展相关。本研究证实了ERK5-IN-1对于非小细胞型肺癌细胞中DCLK1表达及细胞增殖活性的影响,结果表明ERK5-IN-1可以抑制DCLK1的表达以及细胞的增殖活性。同时实验证实了ERK5-IN-1对ERK5的表达以及磷酸化的抑制作用,证明ERK5-IN-1具有ERK5和DCLK1双激酶抑制的活性,对可能的双激酶抑制剂的开发提供了基础。为了证实ERK5-IN-1是否通过DCLK1从而影响细胞增殖活性,我们构建了插入DCLK1c DNA的Plenti载体,并将其转染到肺癌A549细胞的基因组中。通过MTT实验,观察ERK5-IN-1对于转染后的A549细胞的增殖活性的影响。结果表明,DCLK1的上调可以抵抗ERK5-IN-1对细胞增殖的抑制作用。由于上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）与细胞干性密切相关。我们采用western blot实验观察经药物处理后的肺癌细胞中与EMT相关的标志物的表达改变。结果显示ERK5-IN-1降低了NSCLC细胞中间充质样标志物ZEB1的表达,上调了上皮样标志物E-cadherin的表达,展现出ERK5-IN-1对EMT的抑制作用。此外,我们还进行了肿瘤球形成实验,以及流式细胞术,进而研究ERK5-IN-1对干性的影响。球形成实验的结果表明,ERK5-IN-1降低了肺癌细胞的球形成效率。然而,流式细胞术的结果却发现经ERK5-IN-1处理后的NSCLC细胞中,ALDHhigh的百分比增加,我们猜测这可能是由于EMT抑制以及肿瘤微环境的改变所引起的。另外,我们发现经ERK5-IN-1作用后的肺癌细胞,其干性标志物β-catenin的表达减少。进一步验证了ERK5-IN-1可以抑制肺癌细胞的干性。综上所述,ERK5-IN-1抑制了DCLK1激酶的活性,在体外激酶实验中的IC50为8.84n M;并且在肺癌细胞中,抑制了DCLK1的表达、细胞增殖、EMT和干性。ERK5-IN-1具有肿瘤治疗的潜力以及成为DCLK1靶向激酶抑制剂的先导化合物的可能性。