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[目的与背景]肺癌是全球范围内第一大的恶性肿瘤,其发病率和死亡率均很高,并呈现不断上升的趋势。肺癌早期确诊率低,预后差,按照组织学分类,肺癌可以分非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC),在所有确诊的肺癌病例中,NSCLC大约占85%。NSCLC是一种恶性程度极高,发生、发展快,且易发生转移的恶性肿瘤。细胞角蛋白14(cytokeratin-14,CK14)是一种分化特异的蛋白质,属于酸性细胞角蛋白家族。CK14的表达仅限于各种来源的肌上皮和角化复层上皮的基底细胞,是组成细胞骨架的蛋白质之一。已有研究表明,CK14在肺鳞癌、乳腺浸润性导管癌等恶性肿瘤中高表达,此外有研究表明CK14的高表达与食管鳞状细胞癌和宫颈癌变过程、发展及预后有关。脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)作为酪氨酸激酶家族的成员之一,被发现在造血细胞、血管内皮细胞、乳腺上皮细胞、胰腺上皮细胞及鼻成纤维细胞中均有广泛表达。更进一步的研究表明,其表达降低或缺失同多种恶性肿瘤的发生、发展及预后有关。Coopman等于2000年首次发现并报道了 Syk在乳腺癌中的表达情况,提出Syk具有抑制乳腺癌发生的作用。其后的研究发现,Syk在食管癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等肿瘤组织中低表达,并且肿瘤的侵袭性越强表达率越低。尽管CK14与Syk各自在NSCLC中研究已经较为广泛,并且已经取得了相应的研究成果,但是两者同时在NSCLC中的研究还未见报道,我们希望通过同时检测并分析CK14与Syk在NSCLC患者癌组织、癌旁组织和正常肺组织中的表达,初步探讨二者的表达与NSCLC由正常肺组织到癌旁组织、癌组织整个癌变过程中的相关性;并进一步研究CK14与NSCLC患者各临床病理参数的关系,来探讨CK14的表达与NSCLC发生、发展和转移的关系,以及在诊疗和预后评估中的意义。[材料与方法]1.收集自2008年1月至2015年12月于山东大学第二医院胸外科行手术治疗临床病理资料完整的原发性NSCLC患者110例,标本严格按照取材要求选取癌组织、癌旁组织和正常肺组织,常规石蜡包埋、切片,采用免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry,IHC)检测110例NSCLC患者各组织中CK14与Syk的表达,并采用适当的统计学方法,分析从正常肺组织到癌旁组织、肺癌组织整个癌变过程中CK14的表达情况及意义,研究CK14与Syk表达的相关性,进一步探讨CK14的表达与NSCLC患者性别、年龄、组织类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移情况的关系及其与Syk表达有无显著统计学差异。2.选取12例NSCLC患者肺癌组织、癌旁组织、正常肺组织的新鲜标本,常规方法提取蛋白,BCA法测定样品中蛋白的浓度,煮沸变性。采用Western blotting法检测CK14的表达情况,探讨CK14在肺癌组织、癌旁组织、正常肺组织的新鲜标本是否有显著统计学差异。[实验结果]1.在肺鳞癌、肺腺癌中CK14呈阳性表达,而正常肺组织中CK14呈低表达或阴性表达。在肺鳞癌、肺腺癌中Syk呈低表达或阴性表达,而在正常肺组织中Syk呈阳性表达。CK14在肺癌组织中的阳性表达率较癌旁组织和正常肺组织中高,在NSCLC肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织中的阳性表达率分别为 68.18%(75/110)、4.55%(5/110)、0%(0/110),差异具有统计学意义(P<0.001),CK14在癌旁组织和正常肺组织中表达的差异没有统计学意义(P>0.05)。Syk在肺癌组织中的阳性表达率较癌旁组织和正常肺组织低,在在NSCLC肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织中的阳性表达率分别为5.45%(6/110)、95.45%(105/110)、100%(110/110),差异具有统计学意义(P<0.001),癌旁组织和正常肺组织中Syk表达率的差异没有统计学意义(P>0.05)。2.CK14的表达与NSCLC患者的性别、组织类型、分化程度、分期以及淋巴结转移情况相关。男性患者CK14表达率高于女性患者,鳞癌CK14表达率高于腺癌,分化程度越低CK14表达率越高,分期越晚CK14表达率越高,有淋巴结转移者的CK14表达率更高(P<0.05);CK14的表达与NSCLC患者的年龄无关(P>0.05)。3.在肺癌组织中,CK14与Syk的表达呈负相关(r=-0.35,P<0.001);在癌旁组织中,CK14 与 Syk 的表达无相关性(P=0.66,r=0.04)。4.Western blotting结果显示,CK14蛋白在NSCLC癌组织中的表达较癌旁组织和正常肺组织高,在癌旁组织和正常肺组织中的表达无明显差异。5.以是否发生淋巴结转移为因变量,将患者性别、年龄、组织类型、分化程度、分期、CK14表达引入非条件Logistic模型,结果示低分化癌、病理分期Ⅱ期和Ⅲ期、CK14表达阳性是NSCLC患者发生淋巴结转移的重要危险因素(P<0.05)。[实验结论]1.CK14的表达与NSCLC患者的年龄、组织类型、分化程度、分期以及淋巴结转移情况相关,说明CK14的表达与NSCLC的发生、发展、转移及预后有关。2.NSCLC癌组织中CK14表达显著增高,Syk表达显著降低,二者表达呈负相关,说明CK14、Syk的表达共同参与NSCLC的发生、发展过程,联合检测CK14和Syk的表达有望成为评估NSCLC生物学行为的重要分子生物学指标。