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目的在已建立的HCMV先天性中枢神经系统潜伏感染Balb/c老年小鼠模型的基础上,评价老年模型小鼠的免疫风险表型(IRP),同时观察大脑皮质的阿尔茨海默病(AD)样病理改变,初步探讨HCMV先天性潜伏感染老年Balb/c小鼠免疫功能改变与AD发生发展的相关性。方法随机选取HCMV先天性潜伏感染组(A组)、HCMV先天性潜伏感染再激活组(B组)及HF细胞对照组(C组)24~26月龄老年雌性小鼠各6只,眼眶取血并引颈处死后,无菌取小鼠大脑皮质和脾脏,分别作如下试验:(1)体外细胞共培养病毒分离试验、PCR及原位杂交检测HCMV UL83 DNA、RT-PCR检测HCMV UL83 mRNA、间接免疫荧光检测HCMV pp65等确定三组小鼠脑组织中HCMV感染及其感染状态;(2)小鼠免疫状态检测:间接ELISA检测小鼠血清中的HCMVIgG、IgM抗体水平,流式细胞仪分别检测外周血细胞和脾脏细胞悬液中CD3+/CD4+/CD8+ T淋巴细胞亚群数量;(3)大脑皮质AD相关病理学检测:HE染色检测小鼠大脑皮质构筑和病理改变;刚果红染色检测大脑皮质中的淀粉样斑块;镀银染色检查大脑皮质中的神经原纤维缠结;间接免疫荧光检测大脑皮质中的P-Tau蛋白。结果(1)大脑皮质中HCMV感染及感染状态检测:A组和B组小鼠脑细胞与HF细胞共培养病毒分离试验检测均可分离到HCMV;通过取共培养细胞爬片做间接免疫荧光试验检测到pp65抗原的表达;大脑皮质PCR和原位杂交均检测到HCMV UL83 DNA ,但RT-PCR结果显示,A组小鼠大脑皮质无HCMV UL83 mRNA表达,而B组小鼠有HCMV mRNA表达;说明A组小鼠大脑皮质中HCMV处于潜伏感染状态,B组小鼠大脑皮质中HCMV被再激活处于活动性感染状态,C组小鼠大脑皮质的上述检测结果均为阴性,即无HCMV感染。(2)小鼠免疫状态检测:间接ELISA检测小鼠血清中的IgG、IgM抗体水平,A、B两组小鼠IgG抗体均为阳性,C组为阴性, OD值分别为:0.50±0.08、0.76±0.05、0.10±0.05三组之间的差异有统计学意义。小鼠IgM抗体仅B组为阳性,A、C组均为阴性,其OD值分别为:0.14±0.03、0.58±0.06、0.08±0.03 B组与A、C组之间的差异有统计学意义。流式细胞仪分别检测A、B、C三组小鼠T淋巴细胞亚群显示,CD3+T细胞计数比在外周血分别是29.14%、6.87%、44.03%,各组间差异有显著性(P<0.01);CD4+ T细胞计数比在外周血分别是47.03%、38.50%、58.82%,各组间差异有显著性(P<0.01);CD8+ T细胞计数比在外周血分别是34.25%、39.61%、28.73%,各组之间差异均有显著性(P<0.01);CD4+CD8+双阳性T细胞计数比在外周血分别是:10.00%、15.26%、9.00%,B组和A、C组间差异均有显著性(P<0.05),A、C组间差异没有显著性;CD4+/CD8+比值B组小于1。脾细胞悬液中T淋巴细胞亚群检测结果同外周血基本一致。(3)AD相关病理学检测:HE染色发现A及B组小鼠大脑皮质区及海马区出现明显的病理变化,具体表现为大脑皮质区神经细胞数目明显减少,残留神经元核肿胀淡染,神经突起较少呈退行性改变;海马区细胞水肿、胞质疏松、突起变少,锥体细胞颗粒明显减少并发生空泡化、细胞层数减少等; C组大脑皮质及海马未见明显病理变化;刚果红染色发现A组及B组小鼠大脑皮质中均有淀粉样斑块;镀银染色发现A组及B组小鼠大脑皮质中有神经原纤维缠结;间接免疫荧光检测大脑皮质中的P-Tau蛋白结果显示,A组和B组小鼠大脑皮质中可以观察到特异性苹果绿阳性信号,而C组小鼠没有检测到特异性阳性信号。结论:1、在已建立的HCMV先天性潜伏感染老年小鼠模型基础上,研究发现模型小鼠的IRP发生异常改变,导致小鼠免疫功能降低,继而导致中枢神经系统疾病的发生。2、在模型小鼠中观察到SP、NFTs、P-Tau等典型AD样病理改变,提示HCMV是诱导小鼠AD样病理改变的因素之一,且长期HCMV潜伏感染所致的IRP改变可能是促使该病发生发展的重要机制之一。3、AD病毒感染动物模型的建立对研究神经退行性疾病及其发生机制提供新的思路和新的技术平台。