【摘 要】
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目的：利用类风湿患者血清中的自身抗体从噬菌体12肽库中筛选出能与其特异性结合的模拟肽,为人工合成具有诊断价值的肽段,用于RA早期特异性的诊断试剂的研发做前期基础研究工作
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目的：利用类风湿患者血清中的自身抗体从噬菌体12肽库中筛选出能与其特异性结合的模拟肽,为人工合成具有诊断价值的肽段,用于RA早期特异性的诊断试剂的研发做前期基础研究工作。
方法：收集哈尔滨医科大学附属二院2008年3月～2008年10月RA住院病人血清作为筛选血清。病例入选标准符合1987年美国风湿病协会修订的诊断标准(ACR标准)。将RA患者血清按CCP+/RF-,CCP+/RF+,CCP-/RF-,CCP-/RF+,分为四组分别对噬菌体12肽库进行3轮免疫筛选。通过ELISA方法对随机挑取的噬菌体克隆进行初步鉴定,选取阳性克隆用试剂盒纯化噬菌体单链DNA后送测序公司测序。
结果：经过3轮免疫筛选后,特异性结合的噬菌体富集程度增加了百余倍。从4组血清第3轮筛选出的噬菌体所铺的平板上分别随机挑取11个噬菌体克隆,经双抗体夹心ELlSA结果鉴定:CCP-/RF+组有7个阳性克隆;CCP+/RF+组有7个阳性克隆;CCP+/RF-组有8个阳性克隆;CCP-/RF-组有6个阳性克隆。将所得阳性噬菌体克隆的单链DNA纯化后送到测序公司测序,获得能与RA患者血清中的抗体特异性结合的阳性噬菌体呈现的多肽序列。
结论：利用噬菌体随机肽库技术,筛选到了能与RA患者血清中抗体特异性结合的噬菌体克隆。将阳性噬菌体DNA纯化后测序得到能与RA患者血清中的抗体特异性结合的阳性噬菌体呈现的多肽序列。有望为寻找RA高灵敏性、高特异性的血清学诊断指标提供实验基础。
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