【摘 要】
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目的:本研究通过观察针刺并用补阳还五汤对MCAO模型大鼠脑梗死面积、脑组织内再生靶点的影响,并进行网络靶点拓扑学分析,探究针药并用治疗脑梗死的可能机制与再生靶点作用大小及相互作用。方法:将250只SPF级SD大鼠（雌雄各半）随机分为假手术组50只、模型组50只、针刺组50只、药物组50只、针药并用组50只。针药并用组与假手术组均针刺并补阳还五汤灌胃,针刺组针刺,药物组补阳还五汤灌胃并固定,模型组只
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目,课题名称:基于网络靶点效应拓扑学分析的针药并用治疗脑梗塞机制研究,课题编号:81874507；
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目的:本研究通过观察针刺并用补阳还五汤对MCAO模型大鼠脑梗死面积、脑组织内再生靶点的影响,并进行网络靶点拓扑学分析,探究针药并用治疗脑梗死的可能机制与再生靶点作用大小及相互作用。方法:将250只SPF级SD大鼠（雌雄各半）随机分为假手术组50只、模型组50只、针刺组50只、药物组50只、针药并用组50只。针药并用组与假手术组均针刺并补阳还五汤灌胃,针刺组针刺,药物组补阳还五汤灌胃并固定,模型组只抓取固定不予干预,针刺、固定操作每次20min,每日2次,中药灌胃0.6ml/100g/只给药,每天1次。术后1d、3d、5d、7d、14d五个时间点取脑组织,每组各时间点随机抽取10只,其中4只检测脑梗死面积,6只用ELISA法检测大鼠脑组织再生相关靶点（BDNF、TGF-β、VEGF、SYN、PLGF、PDGF-β、NGF、bFGF、ANG-2）含量。运用质量作用定律构建的数学模型计算9个靶点作用大小及靶点相互关系。结果:1.脑梗死面积:术后14d针药并用组与模型组梗死面积相比差异显著（P＜0.01）;针药并用组术后14d与术后1d相比有统计学差异（P＜0.05）,经过干预治疗后,针药并用组与模型组、针刺组、中药组相比较脑梗死面积明显减小（P＜0.05）。2.脑组织血管新生相关靶点检测:①ANG-2含量:针药并用组在术后5d、7d、14d含量均高于模型组（P＜0.05）,针药并用组在术后14d含量高于其它组。②TGF-β含量:针药组在术后各个时间点与各组之间差异不明显（P＞0.05）。③VEGF含量:针药组较针刺组、药物组与模型组在术后1d、3d更能上调VEGF含量（P＜0.05）,在术后7d,针刺组、针药并用组VEGF含量较模型组更高（P＜0.05）,术后14d,针刺组VEGF含量较模型组更高（P＜0.05）。④b-FGF含量:针药并用组术后1d、3d含量高于模型组（P＜0.05）,其中术后3d差异明显（P＜0.01）,其早期下降趋势与其他组比较缓;针刺组术后7d含量高于其它组（P＜0.05）,针刺组术后14d含量高于其它组,但无统计学意义。⑤PDGF-β含量:针药并用组PDGF-β含量术后14d与模型组差异明显。针刺组PDGF-β含量术后7d、14d高于其他组（P＜0.05）;⑥PLGF含量:术后1d,针药并用组与模型组相比可显著上调PLGF表达（P＜0.01）,余时间点该组与其他各组间无明显差异,针药并用组靶点含量在前期较其他治疗组更早出现上升趋势。3.脑组织神经再生相关靶点:①SYN含量:术后3d针药并用组较针刺组与模型组更能促进SYN表达（P＜0.01）,在余下时间点,针药并用组与其他组差异不明显。②NGF含量:术后1d针药并用组NGF含量较其他组高,但无统计学意义,针药并用组在术后14d较模型组含量明显提高（P＜0.05）,术后5d、7d、14d针刺组NGF含量提高较其他组明显,针刺组术后14d含量高于其它组（P＜0.05）。③脑组织内BDNF含量:针药组在术后1d、3d、5d均较模型组含量上升（P＜0.05）,而与模型组比较针刺、中药、针药并用组在7d、14d均能提高BDNF表达（P＜0.05）。4.网络靶点拓扑学分析:在构建再生相关靶点相互间的网络关系中,PDGF-B在网络中作用强度最大,ANG-2、SYN作用系数最大;正向作用关系最强的是PDGF-β与PLGF,负向作用关系最强的是SYN与BDNF;9个靶点中各靶点作用系数离散分布。结论:1.针刺结合补阳还五汤可能通过促进血管新生、神经再生缩小MCAO模型大鼠脑梗死面积比;2.针刺结合补阳还五汤能在早期促进、维持MCAO模型大鼠PDGF-β、b-FGF、PLGF、SYN、VEGF靶点表达,针药并用在临床需早期介入;针刺结合补阳还五汤能促进ANG-2、BDNF、NGF、PDGF-β表达,上述靶点为针药并用治疗脑梗死的关键靶点。针刺在后期能上调MCAO模型大鼠b-FGF、NGF、VEGF、BDNF的表达,提示药物、针刺的作用机制存在差异。3.计算再生9个靶点含量,构建靶点间相互网络关系,得出PDGF-β浓度改变对整体靶点浓度扰动大,ANG-2、SYN在相同浓度条件下对整体靶点的作用强,在治疗脑梗死中时可选择性地促进PDGF-β、ANG-2、SYN表达可能提高疗效。BDNF与SYN、VEGF与PLGF的正负向作用,提示靶点为网络中的不同组成部分,研究靶点间具体关系,通过调节一靶点而控制其他靶点浓度变化,可在后期的药物研发、穴位选定等方面发挥效用。脑梗死后9个再生靶点地位相同,既独立作用,又在网络中相互联系。
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