富血小板血浆(PRP)常温保存理化指标及PDGF-AB、TGF-β1含量变化的研究

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目的Marx等首次将富血小板血浆(PRP)技术引入口腔医学领域,引起了国外口腔界的极大兴趣和研究热情,为口腔种植、牙周重建、口腔颌骨重建等领域对各类组织缺损与创伤的修复治疗提供了新的思路,在口腔医学临床应用中极具发展前景。随着对PRP技术认识的逐步提高,应用范围的不断扩大,临床对富血小板血浆的需求量会越来越多,而只靠临时分离制备已远不能满足临床需要,探寻有效的贮存方式才是解决问题的根本途径。目前国内外学者对PRP保存的研究主要集中在保存后血小板形态学、体外聚集功能指标及输注后临床止、凝血功能的改变等方面。口腔科应用PRP技术主要是利用其富含高浓度的蛋白生长因子,促进组织修复与重建。目前,PRP保存对血小板形态、代谢、功能、损伤的评价及促进组织再生有效成份的各种生长因子含量变化的研究尚未见报道,是否还具有高度的促进组织修复再生能力尚待进一步研究。本实验目的是从口腔临床医学角度,研究PRP在20~24℃连续温和振荡保存三天前、后,血小板计数、WBC浓度、RBC浓度、血小板平均体积、PH、氧分压、二氧化碳分压、乳酸脱氢酶浓度、乳酸浓度及激活状态下PDGF-AB和TGF-β1含量的变化,评价PRP在20~24℃连续温和振荡保存三天后血小板形态、代谢、功能及损伤情况,探讨其促进组织修复再生能力的变化。为临床高效保存、合理利用、保证临床治疗效果及扩展PRP技术在口腔科的临床应用领域提供实验依据。材料及方法符合中华人民共和国献血体检标准的健康者,ACD-A抗凝静脉血200ml,采用白膜回浆法制备PRP,选择20~24℃连续温和振荡保存条件,分别测定静脉血、新鲜PRP、保存三天后PRP的血小板计数、WBC浓度、RBC浓度、血小板平均体积、PH、氧分压、二氧化碳分压、乳酸脱氢酶浓度、乳酸浓度、PDGF-AB和TGF-β1含量等指标。检测PDGF-AB和TGF-β1含量前,参照临床上应用PRP的方法,利用牛凝血酶+10%CaCl2溶液激活血小板,使之释放生长因子进入血清进行定量分析。标本PDGF-AB和TGF-β1含量采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测。数据结果应用SPSS 11.5软件处理分析。结果检测指标结果:静脉血、新鲜PRP(FPRP)、保存三天后PRP(SPRP)中PLT(×109)/L浓度分别为:160±29.09、880±279.96、850±296.89;MPV(fL)分别为:8.56±0.54、8.24±0.80、9.92±0.48;WBC(×109)/L分别为:6.5±1.19、2.6±1.99、2.5±1.91;RBC(×1012)/L分别为:4.6±0.76、0.028±0.023、0.025±0.02;PH值分别为:7.364±0.03、7.093±0.066、7.034±0.078;PO2(mmHg)分别为:39.72±9.23、103.63±13.94、113.89±7.69;PCO2(mmHg)分别为:45.50±6.12、58.95±6.85、32.7±4.92;LDH(mmol/L)分别为:180.83±32.52、231.87±36.85、352.53±61.22;LAC(mmol/L)分别为:1.40±0.23、1.58±0.28、30.18±5.1。静脉血血清、FPRP血清、SPRP血清PDGF-AB浓度(pg/ml)分别为:1.69±0.36、56.12±11.72、58.17±12.1;TGF-β1浓度(pg/ml)分别为:56.19±14.55、331.12±64.94、365.55±73.13。计算指标结果:静脉血PLT总数(×1010):3.7±0.66/每袋;FPRP中PLT总数(×1010):2.6±0.6/u;FPRP中WBC总数(×107):7.3±4.93/u;FPRP中RBC总数(×108):8.0±5.73/u(200ml静脉血制备的PRP为一个u);FPRP的血小板富集系数(PEF)为:5.3±1.0;血小板获得率PRR(%)为:69.12±8.6;FPRP的PDGF-AB富集系数(PDEF)为:36.94±12.44;FPRP的TGF-β1富集系数(TEF)为:6.59±2.03;SPRP的PDGF-AB保存率PDSR(%)为:104.17±11.28;SFPRP的TGF-β1保存率TSR(%)为:110.68±8.29。SPRP组与FPRP组比较:血小板计数无显著性差异(P>0.05);WBC浓度、RBC浓度、MPV、PH、PO2、PCO2、LDH、LAC有显著性差异(P<0.05);PDGF-AB含量无显著性差异(P>0.05);TGF-β1含量有显著性差异(P<0.05),保存后比保存前浓度增加了大约10.68%。结论1、20~24℃连续温和振荡保存PRP的方法简便易行,要求设备少,临床操作简单方便,是口腔科临床少量应用,短期保存PRP的首选方法。2、PRP在20~24℃连续温和振荡保存三天前、后,血小板数量无明显变化。理化指标改变提示血小板形态、代谢等方面发生了一定程度的变化。3、PRP在20~24℃连续温和振荡保存三天前、后,激活状态下PDGF-AB含量无明显改变;TGF-β1含量增加约10.68%左右。20~24℃连续温和振荡保存三天未造成PDGF-AB、TGF-β1含量降低。
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